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Angiotensin 1-7

    Angiotensin (1-7) 抑制纯化的犬Angiotensin 转换酶 (ACE) 活性,IC50 为 0.65 μM。
 
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    生物活性
 
    体外
 
    Angiotensin 1-7(Ang 1-7)通过抑制ACE和释放一氧化氮(NO)而充当激肽诱导的血管舒张的局部协同调节剂。Angiotensin (1-7)在用血栓烷类似物U46619预先收缩的环中以浓度依赖性方式增加由缓激肽(BK)诱导的血管舒张。EC 50在2μM浓度的Angiotensin (1-7)存在下,BK(2.45±0.51nM对0.37±0.08nM)向左移动6.6倍。Angiotensin (1-7)(0.1至2μM)以剂量依赖性方式增强BK诱导的松弛反应。在浓度为2μM的Angiotensin (1-7)时,与单独的BK相比,BK的松弛增加了92%(41±4.4%对92±2.5%,P <0.01)。Angiotensin (1-7)具有与Ang II不同的新型生物学功能。与Ang II相反,Angiotensin (1-7)不是二倍体或醛固酮促分泌素,但与Ang II类似,它刺激血管加压素,前列腺素和NO的释放。Angiotensin (1-7)抵消Ang II的几种作用。在犬冠状动脉和猪冠状动脉中,Angiotensin (1-7)引起血管舒张,而Ang II则分叉地收缩冠状动脉。Angiotensin 1-7(Ang 1-7)通过抑制NRK-52E细胞中TGF-β-ERK途径的慢性刺激来消除甲基乙二醛修饰的白蛋白(MGA)刺激的肌成纤维细胞表型。
 
    体内
 
    在结肠炎诱导后第7天,与未处理(UT)组相比,在硫酸葡聚糖钠(DSS)处理的小鼠中证实Angiotensin 1-7(Ang 1-7)的血浆水平降低7倍。另一方面,与UT小鼠(0.04 ng / mL)相比,在第7天(0.09 ng / mL)DSS处理的小鼠的结肠匀浆中观察到Ang 1-7的显着增加。卵巢切除的(OV)雌性Wistar-大鼠接受雌二醇(500μg/ kg /周)或载体两周。对动物进行麻醉,插管,并在肾灌注压恒定水平下对平均动脉压,肾血流量(RBF)和肾血管阻力作出反应,在0时分级输注Angiotensin 1-7(Ang 1-7)。在用OV或OV雌二醇处理的(OVE)大鼠中测定100和300ng / kg / min,用载体或MasR拮抗剂处理; A779。RB-1对Ang 1-7输注的反应在载体中呈剂量依赖性增加(P 剂量 <0.001)和A779治疗(P 剂量)<0.01)动物。然而,当MasR阻断时,与OVE大鼠相比,OV动物对Ang 1-7的RBF反应显着增加(P <0.05)。当雌二醇被卵巢切除术限制时,A779增加RBF对Angiotensin (1-7)给药的反应,而这种反应在OVE动物中减弱。
 
    实验参考方法
 
    激酶测定
 
    使用固定浓度的底物Hip-His-Leu(1mM)测定使用纯化犬ACE的竞争测定,并改变竞争剂[赖诺普利(0.1至100nM),Angiotensin (1-7)(10nM)的浓度。至10μM),或Sar 1,Thr 8 -Ang II(10nM至10μM)]。抑制常数(IC 50)由各自的竞争曲线确定。为了研究Angiotensin (1-7)对完整冠状环中BK代谢的影响,将125 I- [Tyr 0 ] -BK(终浓度1 nM)加入含有3个预先与1 mL Krebs缓冲液孵育的环的试管中。并用95%O 2和5%CO 2充气在37°C。在添加放射性标记的BK之前10分钟将赖诺普利(2μM),Angiotensin (1-7)(2μM)或Krebs'缓冲液作为对照加入到环中。在5,10和20分钟取出孵育培养基的等分试样并用1%HFBA稀释以抑制肽酶活性。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    细胞分析
 
    将500μM甲基乙二醛与溶解在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的100μMABA温育24小时,然后在10kDa过滤器上洗涤以除去过量的甲基乙二醛,用DMEM / F12无血清培养基重构并通过0.2μmicron过滤器。制备TGF-β(5ng / mL)以处理实验子集中的细胞。细胞与以下一种或组合共同治疗:Angiotensin (1-7)(100 nM),D-Ala7-Ang-(1-7)(10μM),ERK1 / 2激酶抑制剂,PD 98059(1 μM),TGF-β受体激酶抑制剂; SB525334(1μM),AT 1受体拮抗剂氯沙坦(1μM),肾素抑制剂Aliskerin(1μM)和ACE抑制剂赖诺普利(1μM)。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    Animal Administration
 
    小鼠
 
    使用雄性和雌性BALB / c小鼠(1:1比例,6-10周龄,平均体重20g)。将Angiotensin 片段1-7乙酸盐水合物(Ang 1-7)以1mg / mL溶解于0.9%盐水(载体)中并储存在-80℃。从实验的每一天新鲜制备各种剂量(0.01,0.06,0.1,0.3和1mg / kg),并通过每次腹膜内(ip)注射以每次注射500μL的体积给予小鼠,在(预防性接近)之前或之后(治疗方法)DSS治疗。将A779(MAS-1R拮抗剂)类似地溶解在1mg / mL的蒸馏水中并储存在-80℃。通过每日腹膜内注射500μL每天(持续4天)以及结肠炎诱导(预防性方法),向第二组小鼠施用新制备的1mg / kg剂量。第三组小鼠接受含有水的DSS和每日ip注射0.9%盐水(载体)。第四组接受含有水的DSS以及每日腹膜内注射地塞米松(DEX),剂量为0.01-1.0mg / kg或其载体(0.9%盐水)(预防性方法)。
 
    大鼠
 
    使用重量为200±20g的26只卵巢切除的雌性Wistar大鼠。在拮抗剂/盐水输注后,通过微量注射泵以100和300ng / kg / min的两种不同连续剂量静脉内施用Angiotensin (1-7)。每次剂量输注15分钟; 在Angiotensin (1-7)输注期间记录MAP,RPP和RBF,并且每个剂量的最后3-5分钟测量为“对Angiotensin (1-7)输注的响应”。在Angiotensin (1-7)输注期间,RPP通过可调节的主动脉钳维持在Ang1-7前输注水平。在实验结束时,通过过量麻醉剂人道地杀死大鼠,取出左肾并立即称重。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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