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Bevacizumab

  Bevacizumab 是一种人源化的单克隆抗体,高亲和力且特异性地与所有 VEGF-A 结合。

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  Bevacizumab的生物活性

  体外

  人源化单克隆抗体Bevacizumab特异性结合所有VEGF-A同种型,具有高亲和力,并抑制其与VEGFR-1和VEGFR-2的相互作用。 实验分析表明,通过ELISA分析贝伐单抗对结合VEGF的EC50为0.18μg/ mL。 结合动力学测定显示类似的结果,贝伐单抗抑制VEGF诱导的HUVEC增殖,IC50值为0.047±0.0081μg/ mL 。

  体内

  结果表明,与对照组相比,FD006,Bevacizumab和地塞米松的结膜下给药均能显着抑制NaOH烧灼大鼠的CoNV [p] 。 NVP-LDE225和紫杉醇的组合产生持久的抗肿瘤活性,在实验结束时肿瘤大小为1.64cm3,而贝伐单抗加紫杉醇处理的小鼠在第84天达到最大允许的肿瘤大小

  实验参考方法

  Bevacizumab激酶测定

  使用Octet RED上的Bio-Layer Inter-Ferometry测量贝伐单抗或FD006与VEGF的结合动力学。 该测定在30℃下在PBS缓冲液中进行。 在使用前将传感器尖端在缓冲液中预湿15分钟,并且每孔200μL稀释样品(VEGF)或缓冲液填充微孔板,并以1000rpm搅拌。 将抗人IgG生物传感器用Bevacizumab或FD006(10μg/ mL)预饱和,并在缓冲液中洗涤120秒,然后以10μg/ mL,3μg/ mL和1μg/ mL的浓度转移至VEGF。 。 分别测量VEGF结合和解离速率5分钟和10分钟。 使用Octet分析软件从非线性全局拟合计算动力学参数(Kon和Koff)和亲和力(KD)。 进行多次独立测量。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

  Bevacizumab细胞分析

  将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)(1×104细胞/100μL/孔)接种于96孔板中,37℃培养14小时,内皮细胞培养基补充5%热灭活FCS,100U / mL 青霉素,100 U / mL链霉素和内皮细胞生长补充剂。 在低血清饥饿过夜后,用不同浓度的FD006或贝伐单抗处理细胞,其与10ng / mL VEGF预孵育30分钟,并在37,5%CO 2下孵育72小时。 然后,向每个孔中加入10μLCCK8并再孵育4小时。 通过分光光度计在450nm处测量吸光度以确定细胞活力。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

  Animal Administration

  大鼠

  造模后,将90只大鼠随机分为5组(每组18只大鼠),接受结膜下注射,每只大鼠0.05mL(1)0.9%NaCl,(2)溶剂,(3)0.1%地塞米松(地塞米松磷酸钠) ),(4)25 mg / mL贝伐单抗和(5)25 mg / mL FD006在造模后第1天的上颞结膜。 所有化学灼伤和治疗均由一名研究人员进行。 操作者对每个角膜来源的治疗组不知情。 在术后第3,7,14,21和28天,在用过量10%水合氯醛处死大鼠后,收获眼睛用于进一步研究。

  小鼠

  将5周龄Balb / cAnNCrlBR无胸腺(nu + / nu +)小鼠注射到第四乳腺脂肪垫中,将MDA-MB-468细胞(每只小鼠107个细胞)重悬于200μL基质胶中。 肿瘤细胞注射后7天,随机分配荷瘤小鼠(每组n = 10)以接受以下剂量:每天口服NVP-LDE225 20mg / kg,持续4周; 贝伐单抗5mg / kg静脉内(i.v.),每周两次,持续4周,或这些药物的组合与紫杉醇静脉注射。 每周一次10毫克/千克,持续4周。 用游标卡尺评估肿瘤直径,并测量肿瘤体积(cm 3)。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

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