GSK126是一种EZH2抑制剂

　　GSK126（GSK2816126A）是一种有效，选择性的 EZH2 甲基转移酶抑制剂，IC50 为 9.9 nM。

 

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　　体外研究

 

　　GSK126 以相似的效力有效抑制野生型和突变型 EZH2 甲基转移酶活性（K一世= 0.5-3 nM） 与所用底物无关，与 S-腺苷甲硫氨酸 （SAM） 竞争，与肽底物不竞争。GSK126 对其他甲基转移酶和多种其他蛋白质类别（EZH1、IC50=680 纳米）。用 GSK126 处理三种 SCLC 细胞系，诱导生长抑制。SCLC 细胞系（Lu130、H209 和 DMS53）用 0.5、2 和 8 μM GSK126 处理，并通过 WST-8 测定分析生长曲线。在所有三种细胞系中均观察到 8 μM GSK126 处理对细胞生长的抑制，而 Lu130 和 H209 对 GSK126 更敏感，即使在较低剂量下

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　GSK126 在雌性米色 SCID 小鼠中以每 20 g 体重 0.2 mL 的剂量体积腹膜内给药。GSK126有效抑制EZH2突变DLBCL细胞系的增殖，并显着抑制小鼠EZH2突变DLBCL异种移植物的生长。

 

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　　实验参考方法

 

　　激酶检测

 

　　制备包含野生型或突变型（A677G、Y641N、Y641C、Y641H、Y641S 或 Y641F）EZH2 的五成员 PRC2 复合物（Flag-EZH2、EED、SUZ12、AEBP2、RbAp48）。GSK126 溶解在 DMSO 中，并以 0.6 nM 至 300 nM 的浓度进行测试，最终 DMSO 浓度为 2.5%。与喜欢 H3K27me0 作为体外底物的野生型 EZH2 相比，EZH2 Y641 突变体更喜欢 H3K27me2 并且对 H3K27me0 或 H3K27me1 几乎没有活性。A677G 突变体与 EZH2 的野生型和 Y641 突变体形式的不同之处在于它有效地甲基化 H3K27me0、H3K27me1 和 H3K27me2；因此，使用 K27me0（野生型，A677G EZH2）、K27me1（A677G EZH2）或 K27me2（A677G、Y641N、Y641C、Y641F、Y641F）和 Y6ZH 的组蛋白 H3 肽（残基 21-44；最终 10 μM）作为甲基转移酶底物。将 GSK126 添加到平板中，然后添加 6 nM EZH2 复合物和肽。由于 GSK126 的效力处于或接近在 [SAM]=K 下运行的测定的紧密结合极限米，IC50 值是在竞争底物 SAM 相对于其 K 的高浓度下测量的米 （7.5 μM SAM，其中 SAM K米 是 0.3 μM）

 

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　　细胞检测

 

　　JUB - 和PTRF -引入的 DMS53 细胞以 1×10 的密度接种396 孔板中的细胞/孔，并在 12、36、60 和 84 小时使用 WST-8 试剂盒分析细胞生长。还使用 WST-8 试剂盒分析了经过 DZNep 或 GS??K126 处理的 Lu130、H209 和 DMS53 的细胞生长。DZNep 以 5 mM 溶解在 PBS 中，并以 5 μM 的终浓度培养细胞。GSK126 以 10 mM 溶解在 DMSO 中，并以 0.5、2 和 8 μM 培养细胞。

 

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　　动物实验方法

 

　　老鼠

 

　　GSK126 或载体以每 20 g 体重 0.2 mL 的剂量体积腹膜内给药。Pfeiffer 或 KARPAS-422 细胞（1×107） 在 100% Matrigel 中被植入雌性米色 SCID 小鼠的皮下。用卡尺测量肿瘤，并根据肿瘤大小随机分成治疗组。对于功效研究，在开始给药前将 10 只小鼠随机分配到每个治疗组中，一旦肿瘤体积约为 200 mm，则开始 GSK126 治疗3 在 Pfeiffer 和 KARPAS-422 研究和 500 毫米3在 KARPAS-422 间歇给药研究中。每周给小鼠称重并用卡尺测量肿瘤两次。假设两个方差相等的样本进行双尾 t 检验。

 

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