两性霉素BAmphotericin B

    Amphotericin B是针对多种真菌病原体的多烯抗真菌 (fungal) 剂。 它与麦角甾醇不可逆地结合，导致膜完整性破坏并最终导致细胞死亡。

 

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    Amphotericin B的生物活性

 

    体外

 

    两性霉素B的给药受到与输注相关的毒性的限制，包括发烧和发冷，这是先天免疫细胞产生促炎性细胞因子的结果。两性霉素B诱导表达TLR2和CD14的细胞发生信号转导和炎性细胞因子释放。两性霉素B与胆固醇（哺乳动物膜的主要固醇）相互作用，由于其相对较高的毒性而限制了其的用途。两性霉素B以胶束前相或高度聚集态的形式分散在亚相中。当形成可透过小阳离子和阴离子的水孔时，两性霉素B仅杀死单细胞利什曼原虫前鞭毛体（LP）。两性霉素B（0.1 mM）诱导极化电位，表明K+悬浮在等渗蔗糖溶液中的KCl脂质体中的渗漏。两性霉素B（0.05 mM）的负膜电位几乎完全消失，表明Na +进入细胞。

 

    体内

 

    两性霉素B延长了仓鼠瘙痒模型的孵育时间并减少了PrPSc的积累。两性霉素B明显降低了可传播亚急性海绵状脑病（TSSE）小鼠的PrPSc水平。两性霉素B对恶性疟原虫具有直接作用，并影响鼠类疟疾中感染的红细胞的隐匿，寄生虫血症和宿主存活。两性霉素B倾向于延缓寄生虫病的发生，并显着延缓宿主死亡，感染了伯氏疟原虫的小鼠。

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    使用DEAE-葡聚糖和Polyfect试剂分别瞬时转染THP-1和HEK293细胞。转染的质粒包含编码依赖于NF-κB的pELAM-luc荧光素酶报道基因，TLR2，TLR4，CD14和MD2的基因。将细胞（5×10 5 THP-1或1×10 5 HEK293）添加到12孔板中，在18小时后洗涤，并刺激5小时。然后按照指示用报告裂解缓冲液裂解细胞，并使用Promega荧光素酶底物和Monolight 3010发光计分析裂解液的发光。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    细胞分析

 

    通过AmB诱导的针对利什曼原虫前鞭毛体的细胞死亡动力学，随后使用荧光法与DNA结合化合物溴化乙锭（EB）进行。荧光测量是在SPEX Fluorolog II分光光度计上在365-580 nm激发-发射波长下进行的。将终浓度为25×10 6细胞/ mL的前鞭毛体在荧光比色皿中与2 mL不同的缓冲溶液（始终含有10 mM葡萄糖和EB（50 mM））一起温育5分钟。达到信号稳定后，添加AmB并将其溶解在二甲基亚砜中。总是通过添加洋地黄皂苷（50 mg / mL）获得最大的EB掺入量。所有使用的溶液均用75 mM TRIS（pH 4 7.6）缓冲，并包含150 mM NaCl（BNa +），150 mM KCl（BK+），150 mM氯化胆碱和100 mM蔗糖，100 mM NaCl。始终使用高级仪器SW2渗透压仪将所有溶液的渗透压调节至390±5 mOsm。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。