SR144528

　　SR144528 是一个有效且选择性的 CB2 受体拮抗剂，其 Ki 值为 0.6 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外

 

　　SR144528是一种有效的，选择性的CB2受体拮抗剂，具有K一世为0.6 nM。单独的SR144528能够以浓度依赖性的方式刺激（EC50= 26±6 nM，两个实验）在1μM（4倍刺激）下最大的作用是在CHO-CB2细胞中对毛喉素敏感的腺苷酸环化酶活性，而在此浓度下，它对CHO-CB1细胞没有显着影响（15 ％ 抑制）[1]。补充SR144528的原始264.7巨噬细胞显示出降低的caspase-3活性。SR144528通过IC浓度依赖性地抑制微粒体酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶（ACAT）活性50值为3.6±1.1μM。在10μM时，SR144528抑制ACAT活性？68％

 

　　体内

 

　　对[的绑定没有影响3在小鼠中口服（最高10 mg / kg）或icv（10μg/动物）施用SR144528后，可观察到H] -CP 55,940在大脑中的特定部位。SR144528对脾脏大麻素受体的占用是时间依赖性的，在口服3 mg / kg后至少持续18小时[1]。单独服用时，SR144528不会对胃肠（GI）运动产生任何明显影响。SR144528不会阻塞但会增强胃排空延迟[3]。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　测量MAP激酶活性。简而言之，在施用配体之前，将生长至80％汇合的细胞在含有0.5％胎牛血清的培养基中保持24小时。预先用PBS洗涤过的CHO-CB1或-CB2细胞在不存在（基础活性）或存在SR144528的情况下于37°C孵育（10-9 至3×10-6M）20分钟。然后在4°C下用0.5 mL缓冲液A [50 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM NaCl，1 mM乙二醇-双-（β-氨基乙基醚）N，N，N'，N-四乙酸洗涤细胞酸，1 mM Na3PO4然后在含有1％triton X-100、10μg/ mL抑肽酶，10μg/ mL，亮肽素，1 mM二硫苏糖醇和1 mM苯基甲基磺酰氟的缓冲液A中裂解15分钟。然后通过在4°C下以14,000x g离心15分钟来澄清溶解的细胞提取物。取出等份试样（15μL）并保存在-80°C下直至使用。磷酸化分析是在30°C下用γ-[30]（线性分析条件）进行的。33P] ATP通过使用p42 / p44 MAP激酶系统进行。通过液体闪烁计数确定掺入的放射性

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　细胞测定

 

　　在CHO-CB1或-CB2细胞中进行cAMP积累。在不存在或存在SR144528的情况下，将细胞用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤并在37°C的1 mL PBS中孵育15分钟（3×10-9 至10-5M）。加入福斯高林（终浓度为3μM），并将细胞在37°C下再孵育20分钟。通过快速抽吸测定介质并添加1.5 mL冰冷的50 mM Tris-HCl，pH 8，4 mM乙二胺四乙酸终止反应。将菜放在冰上5分钟，然后将提取物转移到玻璃管中。将提取物煮沸并以3500 g离心10分钟以消除细胞碎片。将来自上清液的等分试样干燥，并使用闪烁亲和测定系统通过放射免疫测定法确定cAMP浓度。在没有福司可林的情况下确定基础活性

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　在这项研究中使用雄性Wistar大鼠（240至300 g）。动物到达实验室后一周，进行了三组不同的实验。在第三组实验中，在大鼠中施用SR144528（1 mg / kg腹膜内）。还在载体治疗的大鼠中分析了SR144528的作用。SR144528的体积最大调整为4至5 mL / kg

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。