Calcein-AM实验原理

　　Calcein AM，中文名为该黄绿素乙酰氧基甲指，具细胞膜渗透性，可轻易进入到细胞内，Calcein AM身并无荧光，进入细胞后被细胞中内源性酯酶水解生成具有强负电荷的不能通透细胞膜的极性分子钙黄绿素(Calcein)，从而被滞留在细胞内。而Calcein可发出强绿色荧光，因此常与Propidium Iodide用于细胞活力/毒力检测，激发/发射波长：494/515 nm。

 

　　MCE的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　Calcein-AM的生物活性

 

　　体外研究

 

　　使用方法

 

　　1.Calcein AM工作液的配制

 

　　用DMSO配置5 mM储备液，再用预热好的无血清细胞培养基或PBS稀释储存液，配制成1-10μM的Calcein AM工作液。

 

　　注：请根据实际情况调整Calcein AM工作液浓度，且现用现配。

 

　　2.细胞染色（悬浮细胞）

 

　　2.1离心收集细胞，加入PBS洗涤两次，每次5分钟。细胞密度在1×106/mL。产品推荐：JC-1染色试剂盒使用指南

 

　　2.2加入1 mL Calcein AM工作液，37℃孵育30-45分钟。

 

　　2.3 400 g，离心3-4分钟，弃去上清。

 

　　2.4加入PBS洗涤细胞两次，每次5分钟。

 

　　2.5用1 mL无血清培养基或PBS重悬细胞后，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。

 

　　3.细胞染色（贴壁细胞）

 

　　3.1将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

 

　　3.2从培养基中移出盖玻片，吸除多余培养基。

 

　　3.3加入100μL染料工作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，37℃孵育30-45分钟。产品推荐：Nile Red是在疏水环境下的强荧光染料

 

　　3.4吸去染料工作液，用培养基洗2-3次，每次5分钟，使用荧光显微镜或荧光酶标检测仪进行观察。

 

　　保存条件

 

　　-20℃避光保存

 

　　注意事项

 

　　1.请根据实际情况调整Calcein AM工作液浓度与孵育时间。

 

　　2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

 

　　3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

　　体内研究

 

　　Calcein-AM被发现适用于体内研究，因为它对细胞功能没有有害影响，而且确实是细胞活力的标志物。

 

　　MCE未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。