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线粒体膜电位检测试剂盒 JC-1

  线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-1) 是一种以 JC-1 为荧光探针,快速灵敏地检测组织、细胞或纯化的线粒体跨膜电势差的试剂盒,可以用于早期的细胞凋亡检测。
 
  线粒体膜电位,ΔΨm是线粒体功能的一个重要参数,用作细胞健康的指标。使用JC-1ΔΨm将变化研究。与高ΔΨm健康细胞,JC-1复合物称为J-aggregates形式。在较低的细胞ΔΨm, JC-1仍然在单体的形式。当在490 nm激发时,JC-1单体发出绿色荧光,在~520 nm处最大。JC-1的聚集体在~590 nm处发出桔红色的荧光。
线粒体膜电位检测试剂盒 JC-1
  存储:保存在-20℃,避光,并稳定长达12个月。使用时避免重复的冻融循环。为了立即使用,组件可以储存在2-8℃。
 
  线粒体膜电位检测试剂盒 JC-1的Protocol
 
  1. 标记的细胞
 
  a.在6孔板、12孔板、24孔板或96孔板中培养细胞,培养密度为5×105个/mL。按照您的正常程序孵育细胞。
 
  b.确保JC-1和DMSO已平衡到室温,然后将一小瓶的内容物溶解在提供的DMSO的230°L中,配制200°°M的原液。
 
  c.对于控制管,允许小瓶的CCCP达到室温,加1立方厘米的CCCP(50毫米)。37℃孵育5分钟。
 
  d.每口井添加10井气L JC-1(200井气M),使最终浓度达到2井气M。37℃,5% CO2培养15-20分钟。如果附加标签之后,例如附录V,从步骤2.a开始。如果没有,继续步骤1.e。
 
  e.孵育后,4℃,400×g离心3-4分钟,仔细吸出上盖。
 
  f. PBS(1×)洗涤细胞2次:加入PBS 2 mL(1×)悬浮细胞,涡旋充分混合。4℃,400×g离心3-4分钟,仔细吸出上液。
 
  g.加入500 mol / L PBS(1×)使细胞悬浮。用流式细胞仪、荧光显微镜或荧光酶标仪分析样品。
 
  2. 附加标签与附件V
 
  a.在步骤1之后。d、PBS(1×)洗涤细胞2次:加入PBS 2 mL(1×)悬浮细胞,涡旋充分混合。4℃,400×g离心3-4分钟,仔细吸出上液。
 
  b.加入100个聚乙二醇L Annexin V结合缓冲液(10 mM HEPES, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, pH 7.4),使jc -1染色的细胞悬浮。
 
  c.加入5 mol / L Annexin V, 37℃,5% CO2孵育15分钟。
 
  注:5 L适用于Annexin V,不同供应商使用剂量不同。
 
  d.加入400个回环L Annexin V结合缓冲液(10 mM HEPES, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, pH 7.4)使细胞悬浮。用流式细胞仪、荧光显微镜或荧光酶标仪分析样品。

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