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5-Azacytidine通过DNA甲基转移酶抑制DNA甲基化

    5-Azacytidine是胞苷的核苷类似物,其通过捕获 DNA甲基转移酶 特异性地抑制DNA甲基化。
 
    MCE的所有产品仅用作科学研究,我们不为任何个人用途提供产品和服务
 
    5-Azacytidine的生物活性
 
    体外
 
    与各种基因相关的未甲基化的CpG岛在肿瘤中被部分或完全甲基化,并可以被5-氮杂胞苷重新激活。5-氮杂胞苷在相同浓度范围内可影响Friend红白血病细胞红系分化的弱诱导剂,影响DNA甲基转移酶活性。5-氮杂胞苷可抑制ID 50和ID 90值分别为0.019和0.15μg/ mL的L1210细胞。
 
    体内
 
    当动物暴露于5-Azacitidine(100 mg / kg,ip)2小时或更长时间时,TdR- 3 H的掺入被显着抑制。
 
    5氮杂胞苷的溶解
 
    体内:
 
    请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案,配制前请先配制澄清的储备液,再依次添加助溶剂 (为保证实验结果的可靠性,体内实验的工作也建议您现用现配,当天使用;澄清的储备液可以根据储存条件,适当保存;以下溶剂前的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比):
 
    1、请依序添加每种溶剂: 10% DMSO 》40%PEG300 》5%吐温80 》生理盐水45%
 
    溶解度:≥2.5 mg / mL(10.24 mM); 清晰的解决方案
 
    2、请依序添加每种溶剂: 10% DMSO 》90%(盐水中20%SBE-β-CD)
 
    溶解度:≥2.5 mg / mL(10.24 mM); 清晰的解决方案
 
    3、请依序添加每种溶剂: 10% DMSO 》90%玉米油
 
    溶解度:≥2.5 mg / mL(10.24 mM); 清晰的解决方案
 
    *以上所有助溶剂都可在 MCE 网站选购。
 
    实验参考方法
 
    激酶测定
 
    通过将细胞悬浮于给定体积的0.05mol / LTris-HCl缓冲液(pH 7.4)中,从培养的LI 210细胞中分离出粗制的无细胞提取物,并用Biosonik以70%最大输出的速度进行声提取30秒钟。在L型Spinco超速离心机中以105,000×g离心60分钟(4°C)后收集上清液。无细胞提取物的最终蛋白质浓度约为3 mg / mL。提取物被用作酶的来源。测量核糖核苷酸还原酶活性。酶的单位定义为以1mμmole/ hr的速率催化dCMP合成的量。用于测量嘧啶核苷(CR)和脱氧核苷(TdR,CdR)激酶的测定系统实质上是Chu和Fischer所描述的那些。但是,在沸水浴中加热2分钟可终止反应,根据Bach的方法分离磷酸化衍生物。将五十毫升等分试样加到1英寸的二乙基氨基乙基纸盘上,然后将其置于计数小瓶中,并用0.5 mL的0.5 mol / LPCA洗脱。1小时后,添加12 mL的Diotol,并测定放射性。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    细胞分析
 
    将20mL细胞(大约1×10 4细胞/ mL)吸移到带有螺帽的无菌培养管中,并在37℃下孵育过夜。在添加1 mL代谢物(或培养基)之前,在给定时间段(0到240分钟)内添加1 mL 5-氮杂胞苷(5-azaCR)或培养基开始实验。每天两次通过Model A Coulter计数器测定细胞生长,持续3天。为了确定IDSO和ID90值,将5 mL L1210细胞(5×10 3细胞/ mL)与该药物在37°C下孵育3天,并确定细胞生长。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    Animal Administration
 
    对于体内实验,给白血病小鼠(大约1×10 3个细胞/动物)腹腔内注射0.2mL给定浓度的5-氮杂胞苷(5-azaCR)。2小时后,通过注入0.5 mL标记的代谢物(TdR- 3 H或UR- 3 H,10/μCi/12.5μg)开始反应。1小时后,通过颈椎骨折杀死动物(每组3只小鼠),并用肝素处理腹水,收集,合并,然后立即在800×g的Sorvall冷藏离心机R2C-B中以800×g离心10分钟( 4°C)。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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