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JC-1染色试剂盒使用指南

  MCE产品 JC-1线粒体膜电位检测试剂盒资料 ● ●
 
  规格:1T, 1 mL (100 万细胞)
 
  用途:早期细胞凋亡
 
  检测设备:荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计或流式细胞仪
 
  通道:FITC 通道看绿色,PI 通道看红色
 
  指示:红绿荧光比例变化
 
   Phosphate-buffered saline (PBS) (1× ) 的配制
 
  a.将 PBS (10×) 温浴,直至完全融化。
 
  b.按 1:10 的比例,用 dH2O 稀释 PBS (10×) 至 PBS (1×)。
 
  细胞染色
 
  1) 悬浮细胞
 
  a.以 6 孔板为例,每孔用 1 mL 培养基重悬 100 万细胞,其他培养器皿以此类推。
 
  b.阳性对照的设置:取适量 CCCP (50 mM) 恢复至室温,阳性对照孔培养基中加入 1 μL,其终浓度为 50 μM,细胞培养箱 37℃孵育 5 分钟。
 
  c.取适量 JC-1 (200 μM) 恢复至室温,每孔培养基中加入 10 μL JC-1 (200 μM),其终浓度为 2 μM,细胞培养箱 37℃孵育 15-20 分钟。
 
  d.37℃ 孵育结束后,400 g 4℃离心 3-4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
 
  e.用 PBS (1×) 洗涤 2 次:加入 2 mL PBS (1×) 重悬细胞,400g 4℃离心 3-4 分钟,沉淀细胞,弃上清。重复洗 1 次。
 
  f.再用 500 μL 的 PBS (1×) 重悬细胞,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计或流式细胞仪分析 (绿色荧光:Ex/Em=510/527 nm;红色荧光:Ex/Em=585/590 nm)。
  2) 贴壁细胞:
 
  注:若用荧光分光光度计或流式细胞仪检测贴壁细胞,可先对贴壁细胞进行消化、收集,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。若用荧光显微镜或共聚焦显微镜检测,方法如下:
 
  a.以 6 孔板为例,每孔加入 1mL 细胞培养液。
 
  b.阳性对照的设置:取适量 CCCP (50 mM) 恢复至室温,阳性对照孔培养基中加入 1 μL,其终浓度为 50 μM,轻摇混匀,细胞培养箱 37℃孵育 5 分钟。
 
  c.取适量 JC-1 (200 μM) 恢复至室温,每孔培养基中加入 10 μL JC-1 (200 μM),其终浓度为 2 μM,轻摇混匀,细胞培养箱 37℃孵育 15-20 分钟。
 
  d.37?C孵育结束后,吸除上清,用 PBS (1×) 洗涤2次。
 
  e.加入 500 μL 的 PBS (1×),用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察 (绿色荧光:Ex/Em=510/527 nm,可用 FITC 通道;红色荧光:Ex/Em=585/590 nm,可用PE/PI通道)。

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