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Pinometostat是DOT1L抑制剂

  Pinometostat (EPZ-5676) 是有效的DOT1L组蛋白甲基转移酶抑制剂, Ki 为 80 pM。
 
  MCE 的所有产品仅用作科学研究,我们不为任何个人用途提供产品和服务
 
  生物活性
 
  体外活性
 
  Pinometostat(EPZ-5676)用IC抑制H3K79me250MV4-11和HL60细胞中的3 nM和5 nM值分别为。Pinometostat(EPZ-5676)是一种有效的MV4-11增殖抑制剂,具有IC50 值3.5 nM。匹诺司他(EPZ-5676)诱导协同和持久的抗增殖作用,作为单一药物增加分化标志物的表达和凋亡,并证明与MLL-r细胞中的AML标准护理药物联合使用具有协同作用
 
  体内活性
 
  Pinometostat(EPZ-5676)(70 mg / kg,ip)在MLL重排白血病的大鼠异种移植模型中引起完全持续的消退。Pinometostat(EPZ-5676)(70,35 mg / kg,iv)降低大鼠肿瘤的HOXA9和MEIS1 mRNA水平,并降低体内MLL融合靶基因的表达
 
  实验参考方法
 
  细胞测定
 
  为了在Pinometostat处理后分析MV4-11细胞中组蛋白甲基化的抑制作用,将提取的组蛋白(400 ng)在变性条件下用Tris-Glycine SDS运行缓冲液在10-20%Tris HCl凝胶上分级分离,并转移至硝酸纤维素滤膜中。将滤膜切成条,并在室温(RT)的封闭缓冲液中孵育1小时,然后在封闭缓冲液中于4°C孵育过夜。滤膜用洗涤缓冲液(含0.01%Tween 20的磷酸盐缓冲盐水(PBS)(PBST))洗涤3次,每次5分钟,并在室温下与红外标记的二抗一起孵育1小时。用PBST洗涤滤膜,并在室温下用适当的总组蛋白抗体对照(小鼠抗组蛋白H3(1:20,000),CST 3638,或小鼠抗组蛋白H4(1:10,000),CST 2935)再探测1小时。再次在PBST中洗涤滤膜,并与红外标记的第二抗体(IRDye 800Cw驴抗小鼠IgG(1:20,000),Li-Cor 926-32212)一起在室温孵育1小时。在PBST中彻底清洗后,使用Odyssey红外成像仪(Li-cor)扫描滤镜。为了分析用Pinometostat(EPZ-5676)给药的大鼠外周血单核细胞(PBMC)对H3K79甲基化的抑制作用,将20μLPBMC全细胞裂解液在变性凝胶上分级分离,并通过抗H3K79me2或总H3抗体的免疫印迹进行分析。使用Odyssey软件对H3K79me2抗体和总组蛋白H3对照抗体的特异性信号强度进行定量。通过将H3K79me2信号强度除以同一泳道中的总组蛋白H3控制信号强度来进行归一化。
 
  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
  动物实验方法
 
  0.2 mL MV4-11细胞悬液(1×107PBS中的细胞)皮下注射到雌性无胸腺裸鼠(Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu)中。用卡尺测量肿瘤,当肿瘤体积达到约100 mma时,开始用Pinometostat(EPZ-5676)给药之前,根据肿瘤大小将小鼠随机分为治疗组(n = 10)。3。每天在腹膜内施用10%和20 mg / kg的10%乙醇的盐水中的皮诺美司通,每天3次,共28天。每周两次称重小鼠并用卡尺测量肿瘤,直到研究结束。
 
  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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