Protein A/G Magnetic Beads
2019-10-22 
MCE小分子
MCEProtein A/G Magnetic Beads 为免疫沉淀，共免疫沉淀和染色质免疫沉淀提供了一种快速便捷的方法。
生物活性
MCEProtein A/G Magnetic Beads 通常用于从血清，细胞培养上清液或腹水中分离抗体，以及从细胞或组织提取物中进行抗原的免疫沉淀和共免疫沉淀。Protein A/G Magnetic Beads 包含重组蛋白A / G，该蛋白结合了蛋白A和蛋白G的IgG结合域。
在免疫沉淀过程中，只需要少量的磁珠，并且非特异性结合很低。
方便且节省时间。
低的非特异性结合。
样品损失最少。
抗体结合能力高达0.5-0.8 mg / mL。
稳定的一瓶溶液。
实验参考方法
1.磁珠的制备
1.1将磁珠重悬在样品瓶中（倾斜并旋转2分钟，或轻轻移液10次）。
1.2将25-50μLProtein A/G Magnetic Beads 转移到1.5 mL试管中（转移量可根据需要进行调整）。
1.3向小珠中加入400μL结合/洗涤缓冲液，然后轻轻吸管进行混合。将试管放入磁力架中，以将小珠收集在试管的侧面（此后称为磁分离）。除去并丢弃上清液。重复此步骤2次。
2.抗体结合
2.1用结合/洗涤缓冲液将抗体（Ab）稀释至终浓度5-50μg/ mL。可以根据需要调整Ab的最佳量。
2.2向Protein A/G Magnetic Beads 中添加400μL稀释的Ab。在室温下将试管旋转30分钟，在4°C下旋转2小时。
2.3进行磁分离。如果需要，将上清液转移到新管中进行进一步分析。上清液是非结合部分。
2.4将400μL结合/洗涤缓冲液添加到珠子中，然后轻轻吸管进行混合。将试管放入磁力架中，使珠子靠在试管的侧面。除去并丢弃上清液。重复此步骤4次。
3.靶抗原的免疫沉淀
3.1从磁性分离器中取出管和添加含有抗原（Ag）的（典型地5-50微克在400μL的结合/洗涤缓冲液），并轻轻移液管以重悬Protein A/G Magnetic Beads -AB复合物的样品。
3.2在室温下旋转孵育30分钟或在4°C孵育2小时，以使Ag结合到Protein A / G Magnetic Beads-Ab复合物中。
3.3进行磁分离。除去并丢弃上清液。
3.4每次洗涤使用400μL结合/洗涤缓冲液洗涤Magbeads-Ab-Ag复合物5次。每次洗涤之间进行磁分离，除去上清液并通过轻轻移液重悬。
3.5在400μL结合/洗涤缓冲液中重悬Protein A/G Magnetic Beads -Ab-Ag复合物，并将珠悬浮液转移到干净的试管中。建议这样做以避免结合管壁蛋白的共洗脱。
4.洗脱
这是一种非变性洗脱方法。
4.1进行磁分离并去除上清液。向试管中加入400μL结合/洗涤缓冲液，并旋转5分钟。进行磁分离1分钟，然后除去上清液。然后将25-50μL洗脱缓冲液添加到带有磁珠-Ab-Ag复合物的管中，旋转5分钟。
4.2进行磁分离，收集上清液。
4.3最终溶液可用作SDS-PAGE变性的样品。或者可以立即用中和缓冲液将洗脱液调节至中性pH，并用于进一步分析。
