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NVP-AEW541(AEW541)

    NVP-AEW541是一种有效的 IGF-1R抑制剂,IC50 为 0.15 μM,也抑制 InsR,IC50 为 0.14 μM。
 
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    生物活性
 
    体外
 
    NVP-AEW541抑制重组IGF-IR激酶结构域的体外激酶活性,IC50值为0.15μM,并且与重组InsR激酶结构域等效。NVP-AEW541被证实对IGF-IR激酶具有活性(IC 50 = 86nM),并且在细胞水平上显示出选择性。实际上,与结构相关的天然InsR(IC 50 =2.3μM)相比,发现NVP-AEW541对天然IGF-IR的效力是27倍。NVP-AEW541抑制IGF-I介导的存活,软琼脂和MCF-7细胞的增殖,IC 50分别为0.162μM,0.105μM和1.64μM 。
 
    体内
 
    NVP-AEW541(20,30或50mg/kg)的口服给药导致NWT-21肿瘤异种移植物中基础和IGF-I诱导的受体以及PKB和MAPK磷酸化的消除。NVP-AEW541通过口服管饲[50mg/kg在0.2mL 25mML - (+)- 酒石酸]中每天施用两次,连续14天。对照组类似地每天两次用0.2mL载体[25mM L - (+)- 酒石酸]处理。每周测量肿瘤体积和动物体重三次直至治疗结束。那时,处死动物并收集肿瘤并固定福尔马林用于组织学和免疫组织化学分析。在这两种情况下,NVP-AEW541治疗导致肿瘤缩小达到统计学显着性(分别为HTLA-230和SK-N-BE2c,P = 0.0156和P = 0.0111).
 
    实验参考方法
 
    激酶测定
 
    蛋白激酶的活动是在抑制剂存在或不存在下,通过测量掺入测定33 P从[γ 33 P] ATP(1000次/毫摩尔)为适当的底物。蛋白激酶测定在室温下在96孔板中在下文详述的条件下进行,并通过加入20μL125mMEDTA终止。随后,将30μL(c-Abl,c-Src,IGF-1R)或40μL(所有其他激酶)的反应混合物转移到用甲醇预浸5分钟的Immobilon-PVDF上,用水冲洗,然后浸泡用0.5%H 3 PO 4保持5分钟并安装在真空歧管上。在点样所有样品后,连接真空并用200μL0.5%H 3 PO 4冲洗每个孔。取出膜并在含有1%H 3 PO 4的振荡器上洗涤4次,用乙醇洗涤一次。干燥后,安装在Packard TopCount 96孔框架中,加入10μL/孔的Microscint,计数膜。IC 50值通过线性回归分析计算每种化合物的抑制百分比,一式两份,在四个浓度(通常为0.01,0.1,1和10μM)。一个单位的蛋白激酶活性定义为1 nmole的33 P转移从[γ 33 P]在37℃下ATP至每mg蛋白质分钟的底物蛋白。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    细胞分析
 
    将3000至6000个细胞/孔接种在96孔板中,总培养基体积为100μL/孔。之后24小时加入增加浓度的化合物,一式四份。72小时后,通过加入25μL/孔戊二醛(20%)固定细胞,并在室温下孵育10分钟。然后用200μL/孔H 2 O洗涤细胞2次,并加入100μL亚甲基蓝(0.05%)。在室温下孵育10分钟后,将细胞用200μL/孔H 2 O 洗涤3次。加入200μL/孔HCl(3%),并在平板振荡器上在室温下孵育30分钟后,测量吸光度。在650纳米。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    Animal Administration
 
    小鼠
 
    使用雌性Harlan无胸腺裸鼠NWT-21细胞在DMEM(高葡萄糖,4.5g / L),10%FCS,1%L-谷氨酰胺和1%丙酮酸钠中生长。最初将5×10 6个细胞/动物皮下注射到5只小鼠的右侧。对于体内功效实验,肿瘤为500至800mm 3将切除的非坏死区域切成3×3×3mm的碎片。将肿瘤片段在无菌PBS中洗涤,并将每只动物的一个肿瘤片段皮下移植到右侧腹中。每周三次测定肿瘤体积(长×宽×高×π/ 6)和体重。在治疗的第一天(第0天),通过分层选择治疗组(NVP-AEW541)和对照组(仅限媒介物)(每组8只动物,平均肿瘤体积约95mm 3)每组)。使用NVP-AEW541(20,30或50 mg/kg; 10 mL / kg溶于25 mM L(+)-酒石酸,治疗组)或25 mM,每日7天/周治疗动物po L(+)- 酒石酸(对照组)。抗肿瘤活性表示为T / C%(处理动物的肿瘤体积的平均增加量除以对照动物的肿瘤体积的平均增加量乘以100)。当平均肿瘤体积为约1500mm 3时终止实验。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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