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Masitinib-AB1010

    Masitinib是一种口服的 Kit 抑制剂,IC50 为200 nM。它也可抑制PDGFRα/β,IC50 为 540nM / 800nM。
 
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    Masitinib的生物活性
 
    体外
 
    Masitinib是一种竞争性ATP抑制剂,浓度≤500nM。Masitinib还有效抑制重组PDGFR和细胞内激酶Lyn,并在较小程度上抑制成纤维细胞生长因子受体3.相反,Masitinib显示出对Abl和c-Fms的弱抑制。与伊马替尼相比,Masitinib更强烈地抑制脱颗粒,细胞因子产生和骨髓肥大细胞迁移。在表达人野生型Kit的Ba / F3细胞中,masitinib抑制SCF(干细胞因子)诱导的细胞增殖,IC 50为150 nM,而抑制IL-3刺激增殖的IC 50约为10 μM。在表达PDGFRα的Ba / F3细胞中,masitinib通过IC 50抑制PDGF-BB刺激的增殖和PDGFRα酪氨酸磷酸化300 nM。Masitinib还在肥大细胞瘤细胞系和BMMC中引起SCF刺激的人Kit的酪氨酸磷酸化的抑制。Masitinib抑制Kit功能获得性突变体,包括V559D突变体和Δ27小鼠突变体,在Ba / F3细胞中IC 50为3和5 nM。Masitinib抑制包括HMC-1α155和FMA3在内的肥大细胞瘤细胞系的细胞增殖,IC 50分别为10和30 nM。Masitinib在两种新型ISS细胞系中抑制细胞生长和PDGFR磷酸化,这表明Masitinib显示出对原发性和转移性ISS细胞系的活性,并可能有助于ISS的临床管理。
 
    体内
 
    Masitinib在30 mg / kg时抑制肿瘤生长并增加表达Δ27的Ba / F3肿瘤模型的中位存活时间,无心脏毒性或遗传毒性。与狗中的安慰剂相比,Masitinib(12.5 mg / kg / d,po)可增加总体TTP(肿瘤扩展时间)。Masitinib /吉西他滨的组合在体外对吉西他滨难治性细胞系Mia Paca2和Panc1的增殖具有协同作用,并且在较小程度上对小鼠的Mia Paca-2胰腺肿瘤具有协同作用。
 
    Masitinib的实验参考方法
 
    激酶测定
 
    将96孔微量滴定板用0.25mg / mL聚(Glu,Tyr 4:1)包被过夜,用250μL洗涤缓冲液(10mM磷酸盐缓冲盐水[pH 7.4]和0.05%吐温20)漂洗两次并干燥在室温下放置2小时。测定是在室温下用在激酶缓冲液50微升的最终体积中进行(10毫摩尔MgCl 2,1mM的的MnCl 2,1mM原钒酸钠,20mM的HEPES,pH值7.8)含有ATP在至少一个浓度两次K个米对于每种酶和适量的重组酶,以确保线性反应速率。在引入酶时开始反应,并且每5mol / Lurea混合物加入一个反应体积(50μL)的100mM EDTA终止反应。将板洗涤三次并与1:30,000辣根过氧化物酶缀合的抗磷酸酪氨酸单克隆抗体一起温育,然后洗涤三次并与四甲基联苯胺一起温育。通过分光光度法在450nm处定量最终反应产物。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    细胞分析
 
    为了测定Ba / F3细胞增殖,将微量滴定板以总共10 4个细胞/ 孔接种于100μL含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中,37℃。这些补充或不补充来自X63-IL-3细胞的0.1%条件培养基或250ng / mL鼠SCF。激活Kit的鼠SCF从产生SCF的CHO细胞的条件培养基中纯化。细胞在37℃下与masitinib一起生长48小时,然后与10μL/孔的WST-1试剂在37℃下孵育3小时。形成的甲dye染料的量通过使用扫描多孔分光光度计在450nm处的吸光度来量化。没有细胞的空白孔用作分光光度计的背景对照。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    Animal Administration
 
    雄性Nog-SCID小鼠(7周龄)在20±1℃下在12小时光照/ 12小时黑暗循环中处于无特定病原体的条件下,随意获取食物和过滤水。如上所述培养Mia Paca-2细胞。在第0天(D0),向小鼠腹侧注射200μLPBS中的10 7个 Mia Paca-2细胞。允许肿瘤生长1.5至4周,直至达到所需的肿瘤大小(约200mm 3)。在第28天,将动物分配到四个治疗组(每组n = 7至8),确保每组的平均体重和肿瘤体积匹配良好。然后给予治疗长达4周,之后处死动物。治疗方法包括:a)对照组每日无菌水,b)腹腔注射(ip)50 mg / kg吉西他滨,每周两次,c)每日灌胃100 mg / kg masitinib,或d)腹腔注射联合注射每周两次50mg / kg吉西他滨,每日灌胃100mg / kgMasitinib。用卡尺测量肿瘤大小,并使用以下公式估计肿瘤体积:体积=(长度×宽度2)/ 2。肿瘤生长抑制率计算为(100)×(治疗组的中位肿瘤体积)/(对照组的中位肿瘤体积)
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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