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GSK343是EZH2抑制剂

    GSK343 是一种高效,选择性的 EZH2 抑制剂,IC50 为 4 nM
 
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    GSK343的生物活性
 
    体外
 
    GSK343在吡啶酮的4-位含有正丙基,其EZH2 K i app = 1.2±0.2nM。在这项为期6天的增殖试验中,在本研究中评估的细胞系中,前列腺癌细胞系LNCaP对EZH2抑制最敏感,GSK343的生长IC 50值为2.9μM 。发现GSK343在HeLa细胞中具有13μM的半数抑制浓度值,在SiHa细胞中具有15μM 。
 
    体内
 
    与对照相比,GSK343(5mg / kg)处理的小鼠显示出显着抑制的肿瘤生长。GSK343处理组的平均肿瘤体积和重量显着降低。早在植入后20天,相对于对照组,在GSK343处理的群组中观察到肿瘤生长显着减少; 这种差异在研究的其余部分持续存在。此外,与对照组相比,异种移植模型中GSK343处理的动物显示E-钙粘蛋白的信使RNA水平显着增加,但波形蛋白信使RNA水平显着降低
 
    GSK343的实验参考方法
 
    激酶测定
 
    使用5个成员PRC2复合物(Flag-EZH2,EED,SUZ12,AEBP2,RbAp48)评估针对EZH2的活性。测定方案可总结如下:从100%DMSO中的固体制备10mM GSK343原液。以384孔格式(1:3稀释,第6和18列是等体积DMSO对照)制备11点连续稀释母板,并使用声学分配技术分配到测定准备板,以产生100nL GSK343和DMSO对照标记。测定添加物包括等体积添加10 nM EZH2和底物溶液(5μg/ mL HeLa核小体和0.25μM[ 3]使用多滴组合分配将H1-SAM分配到测定板中。将反应板温育1小时,并用等体积添加的含有0.1mM未标记SAM的0.5mg / mL PS-PEI成像珠(RPNQ0098)淬灭。将板密封,暗适应30分钟,并使用Viewlux成像仪获得5分钟终点发光图像。使用ActivityBaseXE分析诸如Z'和背景信号以及剂量响应曲线的平板统计。使用与EZH2相同的384孔SPA测定法评估EZH1的体外生物化学活性作为5成员PRC2复合物的一部分。缓冲液组分,试剂分配,GSK343平板制备,淬灭条件和数据分析对于EZH1和EZH2是相同的,最终测定浓度为20 nMEZH1,5μg/ mL HeLa核小体和0.25μM[3 H] -SAM。进一步的数据分析,pIC 50枢轴和可视化由TIBCO Spotfire启用。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    细胞分析
 
    为了解释癌细胞系中不同的倍增率,通过检查它们在384孔板中在6天内以大范围的接种密度进行生长,对所有细胞系凭经验确定最佳细胞接种。然后将细胞以最佳接种密度接种并使其粘附过夜。用20点2倍稀释系列的GSK343或0.147%DMSO(载体对照)一式两份处理细胞,并在37℃,5%CO 2中温育6天。然后用每孔25μLCellTiter-Glo裂解细胞,用TECAN Safire2酶标仪定量化学发光。另外,在添加GSK343时收获未处理的细胞板(T 0)量化细胞的起始数量。处理6天后的CTG值表示为T 0值的百分比,并相对于GSK343浓度作图。将数据与4参数方程拟合以产生浓度响应曲线,并确定抑制50%生长所需的GSK343浓度(gIC 50)。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考
 
    Animal Administration
 
    小鼠使用
 
    6周龄雌性裸BALB / c小鼠。为了研究EZH2抑制剂GSK343的作用,在肿瘤体积达到100mm 3后,每隔一天腹膜内注射5mg / kg在100μL磷酸盐缓冲盐水中的BALB / c裸鼠(n = 6)。在该分析中,阴性对照组(n = 6)接受盐水。40天后,杀死小鼠,手术切除皮下肿瘤,称重,拍照,切片,并在10%福尔马林中固定。通过实时逆转录聚合酶链反应测量肿瘤中E-钙粘蛋白,N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达水平。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

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