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LCL161是IAP抑制剂

    LCL161是 IAP 的抑制剂,抑制 HEK293 细胞中 XIAP 和 MDA-MB-231细胞中 cIAP1 的 IC50 分别为 35 和 0.4 nM。
 
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    LCL161的生物活性
 
    体外
 
    LCL161 以剂量依赖性方式显示Hep3B(IC 50 =10.23μM)和PLC5(IC 50 =19.19μM)细胞中的抗增殖作用并显着降低细胞活力。LCL161以剂量依赖性方式在两种敏感细胞系中显着诱导凋亡。从非常低的浓度开始,LCL161显着下调cIAP1的表达。低浓度的LCL161在浓度为0.5 nM时开始抑制cIAP1 [2]。LCL161是一种小分子口服IAP拮抗剂,用于与细胞毒性剂联合使用。在体外研究了LCL161对CYP3A4 / 5(CYP3A)活性的影响。人肝微粒体的结果表明,LCL161以浓度和时间依赖性方式抑制CYP3A(K I为0.797μM,K inact为0.0803min -1)。LCL161在报告基因测定中激活人PXR并在人肝细胞中诱导CYP3A4 mRNA高达~5倍。
 
    在体内
 
    携带肿瘤的小鼠用载体或LCL161 po以50mg / kg /天的剂量或SC-2001 po以10mg / kg /天的剂量,每周5天,或组合持续治疗,持续时间为50mg / kg /天。研究。通过与SC2001和LCL161共同处理显着抑制肿瘤生长,并且在研究结束时,共处理组中的肿瘤大小仅为对照组的三分之一。LCL161是一流的口服Smac模拟物,显示在小鼠异种移植模型中诱导cIAP1的降解和胱天蛋白酶3的裂解
 
    LCL161的实验参考方法
 
    激酶测定
 
    使用探针反应,咪达唑仑-1'-羟基化和睾酮6β-羟基化来评估CYP3A活性。对于可逆抑制,孵育(37°C,10分钟)由(最终浓度)组成:磷酸钾缓冲液(100 mM,pH 7.4),β-NADPH(1 mM),氯化镁(5 mM),微粒体蛋白( 0.025 mg / mL),探针底物(1μM咪达唑仑或25μM睾酮),LCL161(0,0.5,1,5,10,25,50或100μM)和有机溶剂(0.2%乙腈用于咪达唑仑,0.2%甲醇用于睾酮)。预孵育3分钟后,通过加入β-NADPH引发反应,并通过加入乙腈(两个体积)终止反应。先前显示反应与时间和蛋白质浓度呈线性关系(结果未显示),咪达唑仑和睾酮转换分别为8.7±1.3%(n = 3)和2.6±0.20%
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    细胞分析
 
    将细胞(3×10 4活细胞/孔)铺板于96孔透明底白板中,并将板在37℃(5%CO 2)下孵育~24小时。/ 95%空气)在加湿培养箱中。然后用各种浓度(0.5,1,2.5,5,10,25或50μM)的LCL161,阳性对照,利福平(RIF)或媒介物对照(0.1%DMSO)处理细胞(6个重复孔)。 Puracyp剂量培养基中24小时的最终浓度。孵育期后,用PBS洗涤细胞,裂解并根据供应商的说明添加荧光素酶底物。将每个孔的等分试样转移到黑色96孔板的相同孔中。用TopCount NXT微孔板闪烁和发光计数器测量每个孔的发光。细胞活力是通过使用CellTiter-GLO细胞的ATP含量测量经过相同处理的PXR -报道基因测定板分离板测量?发光细胞活力检测试剂盒。所有治疗的细胞活力> 80%
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    动物管理局
 
    小鼠使用
 
    雄性NCr无胸腺裸鼠(5-7周龄)。将每只小鼠皮下接种于背侧,将1×10 6个 Huh-7细胞悬浮于0.1mL含有50%基质胶的无血清培养基中。当肿瘤达到200-300mm 3时,小鼠每天一次接受LCL161(50mg / kg)或SC-2001(10mg / kg)po,或LCL161和SC-2001的组合。控制接收车辆。使用卡尺每周测量肿瘤,并使用以下标准公式计算它们的体积:宽度2 ×长度×0.52。LCL161是一流的口服Smac模拟物,显示在小鼠异种移植模型中诱导cIAP1的降解和胱天蛋白酶3的切割。
 
    大鼠
 
    LCL161口服给药,每周一次,每次21天,起始剂量为10mg(通过使用在10%大鼠中引起严重毒性的十分之一剂量并转化为人等效剂量计算)。在MDA-MB-231三阴性乳腺癌异种移植模型中,每周一次和每日两次LCL161给药同样有效。每周一次耐受性更好,体重减轻。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

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