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Gilteritinib是有效的FLT3/AXL抑制剂

    Gilteritinib是一种有效的FLT3/AXL抑制剂,IC50 分别为 0.29 nM/0.73 nM。

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    Gilteritinib生物活性

    体外

    在测试的78种酪氨酸激酶中,Gilteritinib(ASP2215)在1 nM时抑制FLT3,白细胞酪氨酸激酶(LTK),间变性淋巴瘤激酶(ALK)和AXL激酶超过50%,FLT3 的IC 50值为0.29 nM,约为效力比c-KIT高800倍。在1nM(FLT3,LTK,ALK和AXL)或5nM(TRKA,ROS,RET和MER)的浓度下,Gilteritinib抑制78种测试激酶中的8种的活性超过50%。对于FLT3,IC 50s为0.29nM,对于AXL ,IC 50为0.73nM。吉替替尼在IC 50下抑制FLT3这比抑制c-KIT(230 nM)所需的浓度高约800倍。针对MV4-11和MOLM-13细胞评估Gilteritinib的抗增殖活性,其内源性表达FLT3-ITD。治疗5天后,Gilteritinib抑制MV4-11和MOLM-13细胞的生长,平均IC 50分别为0.92nM(95%CI:0.23-3.6nM)和2.9nM(95%CI:1.4-5.8nM)。MV4-11细胞的生长抑制伴随着FLT3磷酸化的抑制。相对于载体对照细胞,在分别用0.1nM,1nM和10nM Gilteritinib处理2小时后,磷酸化的FLT3水平分别为57%,8%和1%。此外,低至0.1nM或1nM的剂量导致磷酸化ERK,STAT5和AKT的抑制,所有这些都是FLT3活化的下游靶标。为了研究吉替替尼对AXL抑制的作用,用吉替替尼处理表达外源性AXL的MV4-11细胞。在1nM,10nM和100nM的浓度下持续4小时,Gilteritinib处理使磷酸化的AXL水平分别降低38%,29%和22%。

    在体内

    在MV4-11异种移植小鼠中,Gilteritinib(ASP2215)在肿瘤中的浓度比用10mg / kg口服吉替替尼4天的血浆中的浓度高20倍以上。吉替替尼治疗28天导致MV4-11肿瘤生长的剂量依赖性抑制,并诱导超过6mg / kg的完全肿瘤消退。此外,Gilteritinib降低了骨髓中的肿瘤负荷并延长了静脉移植MV4-11细胞的小鼠的存活。

    Gilteritinib的实验参考方法

    激酶检测

    使用ATP浓度测试针对一组78种测试激酶的吉替替尼的激酶抑制活性,所述ATP浓度近似等于TK-ELISA或片外迁移率变动测定中每种激酶的K m值。最初,测试两种浓度的吉替替尼(1nM和5nM)以评估每种化合物对TK活性的抑制作用。然后使用剂量范围的吉替替尼进行进一步的研究以确定激酶的IC 50值,其中用1nM吉替替尼以及c-KIT抑制活性> 50%。TK-ELISA和MSA测定用于进行FLT3,LTK,AXL和c-KIT的IC 50研究; 进行HTRF KinEASE-TK测定以评估IC 50棘皮动物微管相关蛋白样4-ALK(EML4-ALK)的价值。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

    细胞分析

    使用CellTiter-Glo发光细胞存活力测定评估吉替替尼对MV4-11和MOLM-13细胞的作用。进行后续研究以检查吉替替尼和喹喔替尼对表达FLT3-ITD,FLT3-D835Y,FLT3-ITD-D835Y,FLT3-ITD-F691L或FLT3-ITD-F691I的Ba / F3细胞的作用。用DMSO或递增浓度的吉替替尼(0.01,0.1,1,10和100nM)处理MV4-11和MOLM-13细胞 5天,并使用CellTiter-Glo测量细胞活力。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

    Animal Administration

    小鼠

    在移植了MV4-11 AML细胞的裸鼠中评估抗肿瘤活性。还研究了异种移植小鼠中的药代动力学。用口服10mg / kg的吉替替尼治疗MV4-11异种移植小鼠4天。吉替替尼治疗28天导致MV4-11肿瘤生长的剂量依赖性抑制,并诱导超过6mg / kg的完全肿瘤消退。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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