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PTC124是什么

    Ataluren (PTC124) 是可口服的 CFTR-G542X 无义等位基因抑制剂

    体外

    这种过早的“停止”信号(I类突变)阻止细胞产生全长CFTR蛋白。 Ataluren(PTC124) - 一种新的化学实体,可选择性诱导早熟但非正常终止密码子的核糖体通读。

    体内

    Ataluren(PTC124)活性,使用含有无义酶的报告基因进行优化,促进表达肌营养不良蛋白无义等位基因的人和mdx小鼠的原代肌细胞中肌营养不良蛋白的产生,并在药物暴露后2-8周内在mdx小鼠中挽救横纹肌功能。 Ataluren(PTC124)在血浆暴露中对动物的耐受性基本上超过无义抑制所需的那些。 为了诱导无义抑制并增加PPT1酶活性,通过腹膜内(i.p.)注射给予2天龄雄性Cln1R151X小鼠的通读药物Ataluren(PTC124)。 在原理证明研究中,这些治疗每天进行四次,连续2天。 使用10 mg / kg时,Ataluren(PTC124)在肝脏中增加PPT1酶活性(通过非配对t检验P = 0.0001)和蛋白质水平(P = 0.0014,通过非配对t检验),但不增加PPT1酶活性或 皮质中的蛋白质水平。 这种组织特异性效应可能是由于Ataluren(PTC124)无法破坏血脑屏障(BBB),这降低了大脑中Ataluren(PTC124)的生物利用度,并阻止了Ataluren(PTC124)达到有效浓度 在治疗窗内

    实验参考方法

    细胞分析

    将含有LUC-190(UGA)的HEK293细胞的一式两份样品在5μMAtaluren(PTC124)(处理的)或1%DMSO(未处理)的存在下孵育20小时。 收集细胞,在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中洗涤两次,重悬于样品缓冲液(Bio-Rad)中并在干冰上运输至Kendrick Laboratories进行二维电泳分析等电聚焦(pH 3.5-10)在 玻璃管,20,000 V小时。 向每个样品中加入1μg原肌球蛋白内标。 第二维SDS平板凝胶电泳在每个凝胶25mA下进行约6小时。 电泳后,将凝胶转移到PVDF纸上。 使用Phoretix软件的现场移动性的计算机化分析。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

    动物实验研究

    小鼠

    将雄性小鼠随机分配到治疗组或媒介物对照组。 每组6至8只小鼠用10或100mg / kg Ataluren(PTC124)溶解于含有DMSO的PBS(2%用于10mg / kg和20%用于100mg / kg)和(2-羟丙基)-β- 环糊精(22%)经腹膜内(ip)注射,每日4次,连续2天。 用药物载体处理六至八只对照小鼠:含有DMSO(2%或20%)和(2-羟丙基)-β-环糊精(22%)的PBS。 在第二天最后一次注射后立即收集组织并在-80℃下储存以供进一步使用。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

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