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AZD3759说明书

  AZD3759 是一种有效的可渗透中枢神经系统的 EGFR 抑制剂。作用于 EGFRwt,EGFRL858R 和 EGFRexon 19Del,IC50 分别为 0.3,0.2 和 0.2 nM。

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  AZD3759的生物活性

  体外

  在2mM的ATP浓度下,EGFRwt,EGFRL858R和EGFRexon 19Del的IC50分别为102,7.6和2.4nM。 AZD3759还抑制H838wt,H3255L858R和PC-9exon 19Del中的pEGFR,IC50分别为64.5,7.2和7.4nM。 在细胞磷酸化研究中,AZD3759在EGFR激活突变细胞系中也表现出比EGFR野生型细胞系(H838细胞系)高9倍的抑制选择性[1]。

  体内

  在大鼠中以2mg / kg口服给药后,AZD3759的吸收迅速,在1.0小时时达到0.58μM的血液Cmax。 随后,AZD3759的血液浓度单指数下降,平均消除半衰期为4.3小时,接近于静脉内给药4.1小时所获得的相同参数。 大鼠口服剂量后的生物利用度为91%。 在单剂量静脉内输注和口服给药后测定雄性狗中AZD3759的血液药代动力学参数。 在狗中静脉注射IV后,AZD3759血液清除率确定为14mL / min / kg,分布容积为6.4L / kg。 其消除半衰期为6.2小时。 AZD3759的吸收很快,血液Cmax(698 nM)发生在0.5和1.5小时之间。 AZD3759的口服生物利用度优异,为90%。 AZD3759显示出显着的剂量依赖性抗肿瘤效力(在7.5mg / kg qd时肿瘤生长抑制率为78%,在治疗后4周时肿瘤消退为15mg / kg qd),体重减轻<20%,而厄洛替尼有限 效果在这个模型中。 在研究结束时,收集脑组织用于组织学评估。 通过AZD3759处理以7.5和15mg / kg的剂量观察到显着降低的肿瘤面积。 此外,在给药后1小时,通过单剂量的AZD3759以15mg / kg检测pEGFR的调节,这证实了AZD3759的靶标参与

  实验参考方法

  激酶测定[1]

  AZL3759在来自Millipore激酶组的124种激酶中的每一种上以单一1μM浓度进行测试,ATP浓度在其相应的表观Km值的15μM内。 详细的方案可以从Millipore获得。 简言之,将重组激酶在含有肽底物和放射性标记的γ-33P-ATP的适当缓冲液中孵育,同时存在或不存在所需的抑制剂浓度。 通过添加ATP / Mg 2+混合物引发反应。 在室温下温育40分钟后,通过加入3%磷酸溶液终止反应。 将一部分反应混合物点在P30滤垫上以捕获肽,并用磷酸洗涤三次,每次5分钟,以除去非特异性γ-33P-ATP。 然后通过闪烁计数测量磷酸化的底物,其测定与对照反应相比的激酶活性抑制水平[1]。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

  细胞分析[1]

  通过MTS方法测定细胞增殖测定。 简而言之,将细胞接种在96孔板中(密度以允许在72小时测定期间进行对数生长)并在37℃和5%CO 2下孵育过夜。 然后将细胞暴露于浓度为30mM至0.3μM的化合物(例如AZD3759)72小时。 对于MTS终点,通过CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay试剂测量细胞增殖。 使用Tecan Ultra仪器测量吸光度。 进行预测量测量,并使用吸光度读数确定将处理细胞的生长减少至未处理细胞的一半(GI50)值所需的浓度[1]。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

  Animal Administration[1]

  大鼠[1]

  雄性Han Wistar大鼠口服给予1mg甲基纤维素中2mg / kg的AZD3759。 在给药后0.25,0.5,1,2,4和7小时,从小脑延髓池收集脑脊髓液(CSF),并通过心脏穿刺收集血液样品(>60μL/时间点/每个部位), 分离EDTA凝固管,然后立即用3倍体积的水稀释。 收获脑组织并在3倍体积的100mM磷酸盐缓冲盐水(pH7.4)中匀浆。 在LC / MS / MS分析之前,所有样品都储存在-70°C。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

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