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Tideglusib是一种不可逆GSK-3抑制剂

    Tideglusib是一种不可逆的 GSK-3 抑制剂,抑制 GSK-3βWT 和GSK-3βC199A 的 IC50 分别为5 nM,60 nM

    体外

    Tideglusib(NP12)是一种小杂环噻二唑烷酮(TDZD)衍生物,是一种非竞争性的GSK-3β抑制剂,IC50值在微摩尔范围内。 用Tideglusib(NP031112)孵育星形胶质细胞和小胶质细胞培养物完全消除谷氨酸处理后TNF-α和COX-2表达的诱导。 NP031112的这些作用不是由细胞活力丧失引起的,因为星形胶质细胞和小神经胶质细胞24小时暴露于该TDZD不会改变细胞活力。

    体内

    Tideglusib(NP12)处理与APPsw-tauvlw小鼠脑中Ser-9抑制性磷酸化GSK-3β的平均值增加46%相关,NP12处理小鼠中酶的无活性水平增加 与在野生型同窝对照中发现的那些相当(p = 0.893)(每种处理n = 6-8)。 NP12处理导致15个月大的小鼠中推定的GSK-3β指导的位点Ser-202(CP13)和Ser-396/404(PHF-1)的磷酸化显着降低超过60%(p = 0.023和 p = 0.024,分别)[2]。 将Tideglusib(NP031112)(50 mg / kg)注射到大鼠海马中可显着减少红藻氨酸诱导的炎症,如使用T2加权磁共振成像和胶质细胞激活通过水肿形成所测量的,并且在受损区域具有神经保护作用。 海马

    实验参考方法

    激酶测定

    将55μM的[35S] Tideglusib(207 Bq / nmol)与5μMGSK-3β在25℃下在315μL含有150mM NaCl和0.1mM EGTA的50mM Tris-HCl(pH 7.5)中孵育1小时。 在添加35μL含有或不含100mM DTE的相同缓冲液后,将孵育延长另外30分钟。 然后以三种不同的方式处理样品。 首先,将等份的125μL每种样品与375μL的8M GdnHCl在H 2 O中混合,并在80℃下加热5分钟。 将第二份125μL等分试样用H 2 O稀释至500μL,并在室温下放置5分钟。 在两种情况下,之后通过Sephadex G-25凝胶过滤除去游离药物,并通过1450-MicroBeta TriLux计数器上的液体闪烁计数测定结合药物的量。 最后,将每个原始样品的第三个40μL等分试样与10μL不含还原剂的变性电泳样品缓冲液混合,将35μL该混合物加载到10%聚丙烯酰胺凝胶上并进行SDS-PAGE(再次在没有的情况下) 除了已经包括在相应样品中的DTE之外的还原剂,然后对干燥的凝胶进行荧光照相。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

    动物实验研究

    小鼠

    APPsw-tauvlw小鼠组在连续3个月内从9个月和12个月开始给予Tideglusib(每个年龄n = 10-11)或载体(每个年龄n = 10-11)并用于随后的临床病理学分析。Tideglusib以200mg / kg的日剂量给药。 年龄和性别匹配的野生型同窝对照组(每个年龄n = 10)以类似的时间表计划单独接受载体。

    大鼠

    在该研究中使用成年雄性Wistar大鼠(8-12周龄)。 通过腹膜内注射氯胺酮(60mg / kg)和Domtor(5μg/ kg)麻醉大鼠(每组n≥5)并置于立体定位装置中。 将KA(1μg在2.5μLPBS中)单独或与Tideglusib(2ng在2.5μLPBS中)组合注射到海马中。 对相同年龄的对照动物注射载体。

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