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Sorafenib

  Sorafenib (Bay 43-9006) 是有效的多激酶抑制剂,抑制Raf-1,B-Raf 和 VEGFR-3 的 IC50 分别为6 nM,20 nM,22 nM。

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  sorafenib的生物活性

  体外研究

  索拉非尼(BAY 43-9006)也抑制BRAFwt(IC50 = 22 nM),BRAFV599E(IC50 = 38 nM),VEGFR-2(IC50 = 90 nM),VEGFR-3(IC50 = 20 nM),PDGFR-β(IC50) 在生化测定中,= 57nM),c-KIT(IC50 = 68nM)和Flt3(IC50 = 58nM)。 在MDA-MB-231乳腺癌细胞中,索拉非尼完全阻断MAPK途径的活化。 细胞与索拉非尼预孵育(0.01至3μM),并且基础MEK 1/2和ERK 1/2磷酸化的剂量依赖性抑制(分别为IC 50,40和100 nM)[1]。

  体内研究

  索拉非尼在人肿瘤异种移植模型组中表现出广泛的口服抗肿瘤功效。 索拉非尼口服7.5至60毫克/千克。 相对于相应的对照组,在任何治疗组中没有致死性并且体重减轻没有增加。 每日口服索拉非尼(30至60 mg / kg)可在治疗期间在六种模型中的五种中产生完全的肿瘤停滞[1]。 二乙基亚硝胺(DENA)组的存活率为73.3%,索拉非尼组为83.3%,而正常对照组为100%。 与正常对照组相比,DENA组显示肝脏指数显着增加(1.51倍增加,p <0.05),而与DENA组相比,索拉非尼治疗显示肝脏指数显着降低(p <0.05)。 索拉非尼组的肝脏指数显着下降至低于正常对照组的值

  Sorafenib的实验参考方法

  激酶测定[1]

  为了测试化合物对各种RAF激酶同种型的抑制作用,将索拉非尼加入到Raf-1(80 ng),wt BRAF或V599E BRAF(80 ng)与MEK-1(1μg)在测定缓冲液[20 mM Tris]中的混合物中 (pH 8.2),100mM NaCl,5mM MgCl 2和0.15%β-巯基乙醇],终浓度为1%DMSO。 通过添加25μL10μMγ-[33P] ATP(400Ci / mol)引发RAF激酶测定(终体积50μL),并在32℃下孵育25分钟。 通过过滤将磷酸化的MEK-1收获到磷酸纤维素垫上,并使用1%磷酸洗去未结合的放射性。 通过微波加热干燥后,使用β板计数器来量化过滤器结合的放射性[1]。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

  细胞分析[1]

  将MDA-MB-231人乳腺癌细胞系以每孔2×10 5个细胞接种在DMEM生长培养基(10%热灭活的FCS)中的12孔组织培养板中过夜。 用无血清培养基洗涤细胞一次,并在补充有0.1%不含脂肪酸的BSA的DMEM中孵育,所述BSA含有各种浓度的BAY 43-9006(0.01,0.03,0.1,0.3,1,3μM)在0.1%DMSO中的120 分钟测量基础pMEK 1/2,pERK 1/2或pPKB的变化。 用冷PBS(含有0.1mM钒酸盐的PBS)洗涤细胞,并在含有蛋白酶抑制剂的1%(v / v)Triton X-100溶液中裂解。 通过离心澄清裂解物,进行SDS-PAGE,转移至硝酸纤维素膜,在TBS-BSA中封闭,并用抗pMEK 1/2(Ser217 / Ser221; 1:1000),抗MEK 1/2,抗探测。 -pERK 1/2(Thr202 / Tyr204; 1:1000),抗ERK1 / 2,抗-pPKB(Ser473; 1:1000)或抗PKB一抗。 用辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗开发印迹,并用Amersham ECL试剂在Amersham Hyperfilm上开发[1]。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

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