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D-萤光素体外生物发光检测

  D-萤光素,萤火虫萤光素酶的化学发光底物,广泛用于体外生物发光、体内活体成像。萤萤之光,照亮您的科研之路!
 
  ■ Q: D-萤光素的作用原理
 
  D-萤光素 (D-Luciferin) 是萤火虫萤光素酶 (Firefly Luciferase) 的化学发光底物。在ATP 和萤光素酶存在下,萤光素能够被氧化发光 (图 1)。当萤光素过量时,发光亮度与萤光素酶浓度呈正相关。通过萤光素/萤光素酶生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因表达、肿瘤生长、药物反应等
  图 1. D-萤光素发光原理
 
  ■ Q: 游离态和盐形式的 D-萤光素,怎么选?
 
  目前市面上主要有 3 种 D-萤光素,D-萤光素游离酸 (HY-12591A)、钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B)。D-萤光素钠盐、钾盐易溶于水,而游离酸形式难溶于水,需要适当的碱中和才能溶于水。配成溶液后,这 3 种形式的 D-萤光素生物活性相当。
 
  ■ Q: 外生物发光、体内活体成像的检测怎么操作?
 
  以 D-萤光素钾盐为例:
 
  1、体外生物发光检测 (In vitro bioluminescent assays)
 
  1) 将细胞铺在 24 孔黑孔板上,铺板密度为 0.5-2.0×105 个细胞/孔,37℃,培养过夜。
 
  2) 用超纯水配制 15 mg/mL 的 D-萤光素储存液 (100×)。
 
  注:D-萤光素溶液最好现用现配,也可分装后-20℃ 避光冻存,有效期 1 个月。
 
  3) 用预热好的细胞培养基 1: 100 稀释储存液,配制终浓度 150 μg/mL 的 D-萤光素工作液 (1×)。

 
  4) 去除培养细胞的培养基直至无残留。
 
  5) 向细胞内添加 1×D-萤光素工作液后,立即进行图像分析。
  图 2. MDA-MB-231-Luc2 细胞生物发光检测结果
 
  (客户验证)
 
  2、小鼠活体成像分析 (In vivo analysis in mice)
 
  1) 用无菌的 DPBS (no Mg2+、Ca2+) 配制 15 mg/mL 的 D-萤光素溶液,0.2 μm 滤膜过滤除菌。
 
  注:D-萤光素溶液最好现用现配,也可分装后 -20℃ 避光冻存,有效期 1 个月。
 
  2) 按 150 mg/kg 剂量和 10 μL/g 注射体积向每支小鼠注射相应量的 15 mg/mL D-萤光素溶液。
 
  3) 腹腔或静脉注射 5-15 min 后进行活体成像分析。
  图 3. 小鼠活体成像结果
 
  (客户验证)

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