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Coelenterazine

  Coelenterazine 是 apoaequorin 和 Renilla 荧光素酶的发光酶底物。Renilla 荧光素酶和底物 coelenterazine 被用作生物发光共振能量转移 (BRET) 中检测蛋白质-蛋白质相互作用的生物发光供体。Coelenterazine 是一种超氧阴离子敏感化学发光探针,其也用于过氧亚硝酸盐的化学发光检测 。
 
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  生物活性
 
  体外
 
  瞬时表达海肾荧光素酶(RLuc)的HCT-8对照细胞由于P-糖蛋白介导的腔肠素外排转运而显示出较低的生物发光。相比之下,瞬时表达的RLuc HCT-8细胞,其中P-糖蛋白被shRNAi下调,显示出高生物发光
 
  体内
 
  通过静脉内给动物注射腔肠素(2 mg / kg)并将其暴露于5分钟后的电荷耦合器件(CCD)相机中,监测HCC1806-RR的体内生长潜力。Rluc活性被检测为从肿瘤细胞发出的光,并以叠加在动物黑白照片上的伪彩色图像获得。所有小鼠在主要部位均表现出非常高的Rluc活性,而大多数小鼠同时表现出腹股沟ILN转移[4].
 
  实验参考方法
 
  细胞测定
 
  细胞以5×10的密度铺板4每孔细胞数进入24孔板,并生长至80-100%汇合。在即将成像之前,将介质更改为无色溶液,其中包含(以mM为单位):2.7 KCl,139 NaCl,8.1 Na2高压氧4,0.7小时2O,1.5 KH2PO4,1.8氯化钙2,1氯化镁2和5.5 d-葡萄糖。在不存在或不存在Pgp调节剂的情况下,将细胞预孵育15分钟,然后将腔肠素(终浓度为470 nM)直接添加到细胞中
 
  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
  动物实验方法
 
  在从静脉注射稀释于磷酸钠缓冲液(50 mM)中的乙醇储备中配制的腔肠素(4μg/ g)尾静脉注射之前,用甲氧烷或异氟烷麻醉小鼠。注射后第2、6、8和11分钟,在体内成像系统上进行生物发光成像。在成像过程中通过2.5%异氟烷的鼻锥递送来维持麻醉。成像后,动物因颈脱位而被杀死;然后收集肿瘤并称重
 
  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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