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E6446 dihydrochloride拮抗剂

  E6446 dihydrochloride 是一种有效的、可口服的 TLR7 和 TLR9 拮抗剂,可用于有害炎症反应的研究。
 
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  E6446 dihydrochloride的生物活性
 
  体外
 
  E6446二盐酸盐是一种有效的口服TLR7和TLR9抑制剂。E6446有效抑制HEK:TLR9细胞的DNA刺激,IC 50值为10 nM,但在抑制HEK:TLR4细胞的LPS内毒素刺激或HEK:TLR7细胞的R848刺激方面效果较差。E6446有效抑制CpG2216诱导的IL-6产生,但对TLR3配体多肌苷-胞嘧啶的诱导无效。E6446抑制TLR7的能力是配体依赖性的,E6446是RNA诱导IL-6的有效抑制剂,而小分子咪唑并喹啉配体R-848是IL-6诱导的相对较弱的抑制剂。E6446在体外抑制TLR9-DNA相互作用,其IC 50范围为1至10µM ……E6446(0.01-0.03μM)特异性抑制CpG ODN 2006激活TLR9,并以2-8μM阻断被咪唑并喹啉化合物R848激活的TLR7 / 8。E6446在30μM时降低了50%的TLR4激活,在用oligo 2006刺激的HEK-TLR9细胞和用oligo 2216刺激的人PBMC中,IC 50分别为0.01μM和0.23μM 
 
  体内
 
  E6446(20 mg / kg,口服)几乎完全抑制CpG1668诱导的IL-6产生,并剂量依赖性地抑制20和60 mg / kg小鼠中ANA(抗核抗体)的发展[1]。E6446(20,60 mg / kg,po)剂量依赖性地抑制小鼠中的TLR9信号传导。E6446(60,120 mg / kg,po)预防啮齿动物疟疾中的TLRs高反应性和LPS引起的败血性休克,减少急性疟疾中TLR的反应性,抑制TLR7和TLR9的激活
 
  实验参考方法
 
  细胞分析
 
  测定了E6446对寡核苷酸CpG1668的刺激的BALB / c小鼠脾白介素6(IL-6)产生的抑制作用。在添加TLR激动剂之前,将E6446添加至解离的脾细胞(每孔5×10 5,在96孔板中的完整RPMI / 10%胎牛血清中)。刺激细胞72小时,并去除上清液以用于IL-6的ELISA分析。通过在含有100 ng / mL Flt3配体的RPMI中培养BALB / c骨髓细胞7天来生成小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC)。单元格(1×10 5用各种TLR配体刺激过夜或24小时后,测定50μL中的)中IL-6的产生。对于使用人外周血单核细胞的研究,从健康的志愿者供体中分离Ficoll分离的单核细胞,洗涤,并在完全RPMI中用刺激性寡核苷酸CpG2216铺板72小时。上清液中的干扰素通过ELISA定量
 
  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考
 
  动物实验方法
 
  小鼠
 
  MRL / lpr狼疮小鼠进行给药口服每周五次用20或60mg / kg的E6446或60mg / kg的羟开始在5周龄。每10天以50 mg / kg ip腹膜内施用Cytoxan。在治疗开始之前立即采集血清样本,以监测自身反应性抗体的变化。随后,大约每月收集一次血清样品,并在1:500稀释后通过ELISA分析抗dsDNA。在相同的时间间隔采集体重和尿液样本,并通过ChemStrips评估蛋白尿。使用市售的HEp2玻片试剂盒评估抗核抗体(ANA),并将血清在试剂盒缓冲液中稀释至1:100。ANA分数看不懂
 
  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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