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E7046是EP4拮抗剂

    E7046 是一种可口服的,特异性的 EP4 拮抗剂,IC50 值为 13.5 nM, Ki 值为 23.14 nM;E7046 具有抗肿瘤活性。
 
    MCE 的所有产品仅用作科学研究,我们不为任何个人用途提供产品和服务
 
    体外
 
    E7046通过选择性的EP4拮抗作用逆转了PGE2对人骨髓细胞活化和分化的免疫抑制作用[2]。
 
    体内
 
    在CT-26肿瘤模型中,E7046 / RT组合可引起9只动物的抗肿瘤记忆反应。在4T1模型中,与单独的每种治疗相比,E7046和RT的组合还产生明显更好的肿瘤生长抑制活性。该组合通过抑制随后的4T1肿瘤自发性肺转移而显着提高了生存率。E7046(150 mg / kg)抑制多种同源肿瘤模型的生长。对EP4信号的阻断可促进抗肿瘤DC分化并减慢小鼠中的肿瘤生长。E7046治疗以依赖于髓样和CD8C T细胞的方式降低了体内肿瘤的生长,甚至排斥了已建立的肿瘤。此外,E7046和E7777(一种优先杀死Treg的IL-2-白喉毒素融合蛋白)的共同给药可协同破坏髓样和Treg免疫抑制网络,从而在小鼠肿瘤模型中产生有效且持久的抗肿瘤免疫应答。
 
    溶剂与溶解度
 
    体内:
 
    请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案,配制前请先配制澄清的储备液,再依次添加助溶剂 (为保证实验结果的可靠性,体内实验的工作也建议您现用现配,当天使用;澄清的储备液可以根据储存条件,适当保存;以下溶剂前的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比):
 
    1.请依序添加每种溶剂: 10% DMSO 》40%PEG300 》5%吐温80 》生理盐水45%
 
    溶解度:≥2.5 mg / mL(5.17 mM); 清晰的解决方案
 
    2.请依序添加每种溶剂: 10% DMSO 》90%(盐水中20%SBE-β-CD)
 
    溶解度:≥2.5 mg / mL(5.17 mM); 清晰的解决方案
 
    3.请依序添加每种溶剂: 10% DMSO 》90%玉米油
 
    溶解度:≥2.5 mg / mL(5.17 mM); 清晰的解决方案
 
    *以上所有助溶剂都可在 MCE 网站选购。
 
    实验参考方法
 
    细胞分析
 
    使用无菌CM从BALB / c小鼠的股骨冲洗骨髓(BM)细胞。新鲜收获的(BM)细胞(0.5×10 6)是有区别的在20ng / mL的重组小鼠GM-CSF的存在下,±PGE 2(10纳米),于37℃,8 d。在第3和第6天更换CM C新鲜GM-CSF±PGE2。体外分化后,通过流式细胞仪分析细胞。对于某些实验,将1mM的CT26、4T1细胞上清液和/或EP1(SC-57089),EP2(ER-880696),EP3(L-798106)或EP4(E7046)拮抗剂添加到BM细胞中。为了评估分化的BM细胞对T细胞增殖的影响,将分化的小鼠BM细胞与抗CD3 / CD28 Dynabeadstimulated和CFSE(1 mM)染色的T细胞共培养72小时。使用流式细胞仪通过CFSE稀释评估T细胞增殖。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    Animal Administration
 
    为了进行肿瘤同种异体移植功效研究,将6周大的雌性BALB / c小鼠植入癌细胞:每只小鼠sc 1×10 5 CT26或4T1细胞或8×10 5 H22细胞,或在小鼠中植入1×10 5 EMT6细胞。乳脂垫。每只小鼠向C57BL / 6小鼠皮下植入1×10 6 Pan02细胞,向A / J小鼠皮下植入2-3 mm 3 SAI / N肿瘤片段。为了研究T细胞在抗肿瘤应答中的作用,给6周大的雌性裸鼠(无T细胞)皮下注射1×10 5 CT26细胞。当肿瘤达到约50-100 mm 3时,将荷瘤小鼠随机分为媒介物或治疗组,然后开始治疗方案。E7046以100或150 mg / kg的悬浮液在0.5%MC中的口服(po)形式给药,每天给药21 d(QDx21)。对于组合研究,E7777以2.5毫克/小鼠的剂量静脉内(iv)静脉内给药,每周2到3剂注射(Q7Dx2-3)。每周记录2-3次肿瘤体积和体重。为了与当前的免疫疗法进行比较,除了媒介物对照和E7046 C E7777组,还为小鼠分配了抗PD1抗体或抗小鼠PD-1 C抗小鼠CTLA4抗体治疗组。抗PD-1和抗CTLA-4抗体(1 mg / mL)以100 mL腹膜内给药,间隔4 d(Q4Dx3)3次,每次总计300 mg。将同型对照以1 mg / mL腹膜内注射至对照组。对于CD4CT和CD8CT淋巴细胞耗竭,抗小鼠CD4或抗小鼠CD8抗体或其同种型对照以每4天ip注射2.5 mL / mL的100 mL剂量给药,每只小鼠共注射4次(1 mg)。为了消耗巨噬细胞,每隔一天腹腔注射含氯膦酸盐或对照脂质体,剂量为1 mg /小鼠,共7次注射。对于活H22细胞攻击,将初始肿瘤已完全稳定地消失的小鼠与年龄匹配的幼稚对照配对,并以8×10的剂量皮下注射 每隔一天注射7次。对于活H22细胞攻击,将初始肿瘤已完全稳定地消失的小鼠与年龄匹配的幼稚对照配对,并以8×10的剂量皮下注射 每隔一天注射7次。对于活H22细胞攻击,将初始肿瘤已完全稳定地消失的小鼠与年龄匹配的幼稚对照配对,并以8×10的剂量皮下注射5个 H22细胞,位于原始植入位置的相反侧。在所有实验中,每周两次测量肿瘤体积和体重。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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