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SP2509是LSD1拮抗剂

    SP2509 是有效,选择性的 LSD1 拮抗剂,IC50 值为 13 nM。
 
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    生物活性
 
    体外
 
    SP2509(250、500、1000 nM)抑制LSD1活性,耗尽菌落生长并诱导培养的人急性髓性白血病细胞凋亡和细胞死亡,并在p57 Kip,KLF4和p21启动子上增加H3K4Me3并诱导p57Kip的mRNA表达,AML细胞中的KLF4和p21。SP2509(250,1000 nM)诱导培养的和原代AML细胞的形态分化特征。此外,SP2509与PS结合可对培养的和原代AML细胞发挥协同致命活性。SP2509不会破坏CoREST-LSD1交互的稳定性,并且对CRC没有重大破坏作用。SP2509(1或10 ?M)诱导细胞死亡,但在0.1 ?M的低协同作用下没有形态变化。SP2509同样会干扰髓母细胞瘤细胞的活力
 
    体内
 
    SP2509(25 mg / kg)和/或PS(5 mg / kg)的治疗显着增强了PS介导的CD34 +原发性AML细胞活力的丧失,并改善了携带AML异种移植和原发移植的小鼠的存活率
 
    实验参考方法
 
    激酶测定
 
    为了测量LSD1的活性,使用了基于鲁米诺的测定法。甲总洗脱液的5μL在LSD1反应缓冲液(50mM的Tris,pH 8.5中,50mM KCl的,5毫摩尔MgCl稀释2,5纳摩尔鲁米诺,20微克/毫升辣根过氧化物酶,1%的Triton X-100),和加入10 ?M H3K4me2(1-21 aa)肽作为底物。加入DMSO和抑制剂。每个反应的总体积为100 ?L。使用EnSpire多模式读板器在白色96孔板上测量样品,发射波长为428 nm。测定使用三个单独的纯化(n = 3),每个纯化三个重复。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    细胞分析
 
    实验中使用了Daoy和D283 Med细胞。在补充有10%FBS,50 U / mL青霉素和50μg/ mL链霉素的RPMI培养基1640中培养ONS-76细胞。将所有髓母细胞瘤细胞系保存在37°C的培养箱中,湿度为5%CO 2 /5%O 2 /90%N 2且湿度最大。XTT分析以一式三份(n = 3)进行,一式三份,每次100 ?L ,使用1×10 3 Daoy细胞/孔,4×10 3 D283 Med细胞/孔和1×10 3 ONS-76细胞/孔最初接种于96孔板中的培养基。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    Animal Administration
 
    将雌性NOD / SCID小鼠暴露于2.5 Gy的辐射下。第二天,将500万个OCI-AmL3细胞注射到小鼠的侧尾静脉中,并监测小鼠7天。对于每种治疗,在每组8只小鼠中进行以下治疗:单独的溶媒,25 mg / kg SP2509、5 mg / kg panobinostat和SP2509加panobinostat。在第7天开始处理OCI-AmL3细胞。每周两次(星期二和星期四)腹膜内(IP)施用SP2509(在增溶缓冲液[20%Cremaphor,20%DMSO,60%无菌水]中配制)3周,然后停药。Panobinostat(以5%DMSO / 95%生理盐水配制)每周3天(MWF)腹膜内注射3周,然后停用。确定在这些研究中使用的PS剂量是安全有效的。利用NSG小鼠和原代AmL细胞进行了单独的体内实验。植入AmL细胞后(存在大于1%的CD45+外周血中的+细胞),小鼠用SP2509和/或PS治疗三周。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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