AVE 0991

　　AVE 0991是[一种有效的非肽Ang-（1-7）受体Mas激动剂。125I] -Ang-（1-7）竞争性地结合到牛主动脉膀胱细胞膜，IC50 为21 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外活性

 

　　AVE 0991是一种非肽化合物，在血管内皮上具有类似于Ang-（1-7）的作用。AVE 0991和未标记的Ang-（1-7）竞争[125I] -Ang-（1-7）结合IC分离牛主动脉内皮细胞膜50s分别为21±35和220±280 nM。NO和O的峰值浓度2-- AVE 0991钠盐和Ang-（1-7）（均为10μM）的释放无显着差异（NO：295±20和270±25 nM; O2--：18±2和20±4 nM）。但是，AVE 0991的生物活性NO释放量比Ang-（1-7）高约5倍

 

　　体内活性

 

　　与赋形剂处理的动物相比，AVE 0991（0.58 nmol / g）在野生型小鼠中产生明显的水利尿作用（0.06±0.03 mL对0.27±0.05；每组n = 9； P <0.01）。AVE 0991（AVE）的抗利尿作用与尿渗透压升高（1669±231.0 mOsm / KgH2O对681.1±165.8 mOsm / KgH2赋形剂治疗小鼠中的O；P ＜0.01）。Mas的基因缺失消除了水分加载过程中AVE 0991的抗利尿作用（在AVE 0991处理的小鼠中为0.37±0.10 mL [n = 9]对0.27±0.03 mL [n = 11]）。正如C57BL / 6小鼠所观察到的，与载药的动物相比，在载水的瑞士小鼠中施用AVE 0991（0.58 nmol / g）也会显着减少尿量（0.13±0.05 mL [n = 16] 0.51±0.04 mL [n = 40]; P <0.01）。用AVE-0991治疗一周后，灌注压力显着降低（56.55±0.86 vs. 68.73±0.69 mmHg，用赋形剂处理的大鼠），收缩压增加（11.40±0.05 vs. 9.84±0.15 g，用赋形剂处理的大鼠）。治疗的大鼠），张力上升率（+ dT / dt; 184.30±0.50 vs. 155.20±1.97 g / s在载体治疗的大鼠中），张力下降率（-dT / dt; 179.60±1.39 vs. 150.80±2.42载体治疗的大鼠的克/秒）。还观察到心率（HR）略有增加（220.40±0.71 vs. 214.20±0.74 beats / min在媒介物治疗的大鼠中

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定

 

　　用巨细胞病毒启动子驱动并由新霉素选择的大鼠Mas cDNA稳定转染猴肾（COS）细胞和中国仓鼠卵巢（CHO）细胞。 125角度-（1-7）（0.5×10-9 mol / L）在24孔板中于4°C下在0.3 mL不含0.2％BSA，0.005％杆菌肽，0.1 mol / L PMSF和0.5 mol / L的无血清培养基（DMEM）中孵育60分钟在存在或不存在AVE 0991的情况下，邻菲咯啉与Mas转染的COS细胞（AVE，10-10 至 -5 摩尔/升）。用冰冷的无血清DMEM洗涤2次后，用0.1％Triton X-100破坏细胞。结合放射性在伽玛计数器中测量。罗丹明-Ang-（1-7）在Mas转染的CHO细胞中的结合在相似条件下使用2×10进行-9 摩尔/升若丹明标记的Ang-（1-7）存在或不存在AVE（10-6 摩尔/升），CV11974（10-6 mol / L）或PD123319（10-6 摩尔/升）。NSB是在10个存在下确定的-6 摩尔/升Ang-（1-7）

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　老鼠

 

　　瑞士雄性 老鼠Mas -KO（Mas-/-）纯遗传背景C57BL / 6上的雄性小鼠和野生型C57BL / 6对照小鼠（Mas+ / +）。在有意识的小鼠中通过腹膜内注水（0.05 mL / g体重[BW]）诱导水利尿。药物以相同的注射量加注水，以预先确定的体积（0.01 mL / g BW）给药。在第一组实验中，用以下方法治疗WT小鼠（C57BL / 6，对照组）或Mas -KO小鼠：（1）0.58 nmol / g AVE 0991（n = 9，对照组； n = 11，Mas -KO小鼠） ）； 或（2）AVE 0991的载体（10μMKOH ，0.01 mL / g； n = 9，对照； n = 9，Mas -KO）。在第二组中，用以下方法治疗瑞士小鼠：（1）媒介物（n = 36）；（2）0.58nmol / g AVE 0991（n = 16）；（3）46 pmol / g Ang-（1-7）拮抗剂A-779（n = 4）； （4）2 nmol / g DuP-753或CGP 48933（n = 5）； （5）2纳摩尔/克AT2受体拮抗剂PD123319或PD123177（n = 9）；（6）AVE 0991与A-779结合； （7）AVE 0991与DuP-753或CGP 48933组合（每个n = 4）； （8）或AVE 0991与PD123319（n = 5）或PD123177（n = 4）组合。在加水后60分钟测量尿量，并获得尿液样品以测定渗透压。AVE 0991的剂量基于在瑞士小鼠中进行的初步实验。

 

　　老鼠

 

　　使用重量为250-300g的雄性Wistar大鼠。用管饲法口服给予AVE-0991（1 mg / kg，n = 9）或运载体（0.9％NaCl，n = 11）治疗大鼠。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。