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TEPP-46-ML-265

    TEPP-46 是一种有效,选择性的丙酮酸激酶 M2 (pyruvate kinase M2) 激活剂,AC50 值为 92 nM,对 PKM1,PKL 和 PKR 作用较小或没有作用。
 
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    生物活性
 
    体外
 
    TEPP-46和DASA-58通过类似于内源性激活剂FBP的机制激活PKM2。用TEPP-46或DASA-58预处理细胞可防止过氧钒酸盐诱导的PKM2活性抑制。TEPP-46还引起乙酰辅酶A,乳酸,核糖磷酸和丝氨酸的细胞内水平降低。TEPP-46抑制LPS诱导的Hif-1α和IL-1β,以及一系列其他Hif-1α依赖性基因的表达。TEPP-46处理可显着下调M1标记Il12p40和Cxcl-10的表达。使用TEPP-46激活PKM2会显着抑制FSL-1和CpG诱导的Il1b mRNA表达。TEPP-46抑制Mtb诱导的Il1b mRNA水平,提高Mtb诱导的Il10b mRNA水平,并且对Tnf的水平没有影响。
 
    体内
 
    TEPP-46具有良好的口服生物利用度,具有相对较低的清除率,较长的半衰期以及可预测药物在肿瘤组织中暴露的分布参数量。150 mg / kg的TEPP-46在A549异种移植肿瘤中很容易达到最大的PKM2活化作用
 
    实验参考方法
 
    激酶测定
 
    如前所述,通过监测丙酮酸依赖的乳酸脱氢酶(LDH)的NADH向NAD +的转化来测量丙酮酸激酶活性。简而言之,对于细胞系实验,在开始用DMSO或活化剂处理之前1小时,将培养基替换为新鲜培养基。另外,在指示时,在细胞裂解前10分钟加入100μM过钒酸盐。细胞在冰上用含有2 mM DTT和蛋白酶抑制剂的NP-40缓冲液溶解,并通过以21,000 x g离心的方式澄清。5μL上清液用于评估丙酮酸激酶活性。随后将丙酮酸激酶活性针对总蛋白含量标准化。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    细胞分析
 
    在开始治疗前24小时,将2,000个细胞接种到96孔板中。CellTiter96 ?水溶液是用来评估以下氧化剂和PKM2活化剂组合治疗细胞活力。MTS:(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑)。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    动物管理局
 
    具有小鼠PKM1 cDNA组成型表达的H1299亲本和H1299细胞(H1299-PKM1细胞)在补充了10%胎牛血清,青霉素/链霉素,2 mM谷氨酰胺和潮霉素的RPMI中繁殖,以进行转基因选择。收集细胞,重悬于无菌PBS中,并将5×10 5个细胞皮下注射到nu / nu小鼠中。通过卡尺测量监测肿瘤生长,在指定时间后处死小鼠并收获肿瘤。称重肿瘤,分开并在液氮中快速冷冻或在福尔马林中固定以备后用。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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