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Phorbol 12-myristate 13-acetate

    Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一种佛波酯,是蛋白激酶 C (PKC) 和 SphK 的激活剂。
 
    MCE 的所有产品仅用作科学研究,我们不为任何个人用途提供产品和服务
 
    生物活性
 
    体外
 
    为了检查PKC在p38MAPK磷酸化中的作用,用PKC激活物PMA(100 nM)刺激细胞,该激活物模拟PKC的天然激活物DAG与PKCs C1区的结合。在两种细胞类型中,与GnRH在αT3-1细胞中观察到的相似,通过PMA观察到p38MAPK磷酸化,即缓慢的持续活化(分别在30分钟时分别为3.2倍和3.6倍)。由GnRH和PMA激活的PKC在p38MAPK磷酸化中起不同作用的矛盾发现可能由PKC的不同定位所解释。通过电压门控性Ca 2+通道和Ca 2+通过Ca 2+内流介导αT3-1细胞中p38MAPK磷酸化的基础,GnRH和PMA刺激动员,而在分化的LβT2促性腺激素细胞中,它仅由Ca 2+动员介导
 
    体内
 
    PMA是PKC激动剂,可逆转5-羟基癸酸(5-HD)引起的损伤。因此,通过PKC途径激活mitoKATP保护了SOD和MDA中的线粒体功能
 
    实验参考方法
 
    细胞分析
 
    αT3-1和LβT-2细胞在5%CO 2潮湿培养箱中的DMEM中单层培养在37°C下。在相同培养基中用0.1%FCS进行血清饥饿16小时。然后按照指示的时间长度添加GnRH和PMA。通常,通过ExGen 500或jetPRIME瞬时转染αT3-1细胞,而仅通过jetPRIME转染试剂瞬时转染LβT2细胞。对于使用显性阴性(DN)PKC的实验,将αT3-1细胞(在6 cm平板中)用1.5μgp38α-GFP,3μg对照载体,pCDNA3或3μgDN-PKCs构建体转染。对于LβT2细胞,用4μgp38α-GFP和9μg对照载体pCDNA3或9μgDN-PKCs构建体进行转染(在10 cm平板中)。转染后约30小时,将细胞血清饥饿(0.1%FCS)处理16小时,然后用GnRH或PMA刺激,用冰冷的PBS洗涤两次,用裂解缓冲液处理,随后进行一个冻融循环。收获细胞;离心(15,000×g,15分钟,4°C)后,将上清液用于免疫沉淀实验
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    动物管理局
 
    大鼠
 
    所有实验均对雄性Wistar大鼠(体重250-280g)进行。135只Wistar大鼠随机分为7组。(1)假手术组(n = 21)的大鼠侧脑室注射0.9%的生理盐水;(2)IR组(n = 21)在大脑中动脉闭塞(MCAO)前30分钟给予侧脑室注射0.9%生理盐水。(3)在MCAO前30分钟,给羧甲基环己酮(CBX)组(n = 21)的大鼠脑侧面注射CBX(5μg/ mL×10μL);(4)在MCAO前30分钟,对Sch-6783组(n = 21)的大鼠进行侧脑室注射DZX(2 mM×30μL);(5)对5-HD组(n = 21)的大鼠进行脑侧脑室注射5-HD(100mM×10μL),在10分钟后,在MCAO之前15分钟注射DZX;(6)DZX + Ro组(n = 15)的大鼠脑室侧面注射DZX,10分钟后,在MCAO前15分钟注射Ro-31-8425(400μg/ kg);(7)5-HD + PMA组(n = 15)的大鼠在注射5-HD和DZX后进行腹膜内注射PMA(200μg/ kg)。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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